CAJ | 학술논문

背景与目的:在前期研究中发现,16HBE-C细胞表达变化的基因中有未知基因参与,因其与BPDE有关,所以命名为brg(anti-BPDE related gene)基因.本研究应用cDNA末端快速扩增法(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增此未知基因的全长,以进行下一步的基因功能研究.材料与方法:应用cDNA末端快速扩增法(RACE技术),对3'和5'端分别设计了梯度PCR,巢式PCR等优化程序,以获得特异的产物,然后对特异产物直接测序,将测序结果进行生物信息学分析,基因拼接等获得新基因brg全长.结果:3'和5'端均成功获得特异性产物,3'RACE测序为394 bp,有明显的PolyA加尾信号,有编码区的终止密码子;5'RACE测序为1 017bp,有起始密码子ATG,其中197 bp为3'和5'全长共有序列.将3'和5'序列拼接,结果全长1 214 bp,生物信息学分析brg基因阅读框1 032 bp,编码344个氨基酸.结论:所得结果与设计一致,说明所采用的技术路线是简便可行的,brg基因可能在反式二羟环氧苯并(a)芘的致癌机制中起重要作用.
배경여목적:재전기연구중발현,16HBE-C세포표체변화적기인중유미지기인삼여,인기여BPDE유관,소이명명위brg(anti-BPDE related gene)기인.본연구응용cDNA말단쾌속확증법(rapid amplification of cDNA ends,RACE)확증차미지기인적전장,이진행하일보적기인공능연구.재료여방법:응용cDNA말단쾌속확증법(RACE기술),대3'화5'단분별설계료제도PCR,소식PCR등우화정서,이획득특이적산물,연후대특이산물직접측서,장측서결과진행생물신식학분석,기인병접등획득신기인brg전장.결과:3'화5'단균성공획득특이성산물,3'RACE측서위394 bp,유명현적PolyA가미신호,유편마구적종지밀마자;5'RACE측서위1 017bp,유기시밀마자ATG,기중197 bp위3'화5'전장공유서렬.장3'화5'서렬병접,결과전장1 214 bp,생물신식학분석brg기인열독광1 032 bp,편마344개안기산.결론:소득결과여설계일치,설명소채용적기술로선시간편가행적,brg기인가능재반식이간배양분병(a)비적치암궤제중기중요작용.