CAJ | 학술논문

背景与目的:已有研究表明K-ras基因点突变及胰岛素样生长因子I受体(insulin-like growth factor receptor type 1, IGF-IR)过表达在胰腺癌的发生发展过程中起着重要作用,针对K-ras mRNA和IGF-IR mRNA的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN)均可抑制胰腺癌细胞的增殖.本研究旨在探讨针对K-ras基因12密码子点突变的硫代反义寡核苷酸(K-ras ASODN)联合IGF-IR硫代反义寡核苷酸(IGF-IR ASODN)对人胰腺癌Patu8988细胞体内外增殖和凋亡的影响.方法:顺序特异引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction using special sequence primers. PCR-SSP)法和基因测序检测Patu8988细胞K-ras点突变形式,根据点突变形式设计并合成K-ras ASODN.K-ras ASODN和IGF-IR ASODN分别单独和联合作用Patu8988细胞后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验及透射电镜观察其对Patu8988细胞增殖及形态结构的影响;流式细胞术(FCM)检测K-ras和IGF-IR蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测K-ras和IGF-IR mRNA表达水平;以Patu8988细胞建立裸鼠人胰腺癌模型,观察K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用在体内的抗肿瘤效果.结果:PCR-SSP法和基因测序检测表明Patu8988细胞存在K-ras基因第12密码子点突变,其突变方式为GGT→GTT.2～32 mg/L的K-ras ASODN和2～32 mg/L的IGF-IR ASODN单独应用均能一定程度抑制Patu8988细胞增殖、诱导细胞凋亡,两者联合应用较单独应用抑制作用更为显著(P<0.01).体内实验表明,K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用较单独应用能更有效地抑制BALB/c裸鼠胰腺癌的生长(P<0.01).结论:K-ras ASODN和IGF-IF ASODN两种反义寡核苷酸对人胰腺癌Patu8988细胞增殖的抑制具有协同作用,其机制可能是联合下调K-ras、IGF-IR蛋白及K-ras、IGF-IR mRNA表达水平.
배경여목적:이유연구표명K-ras기인점돌변급이도소양생장인자I수체(insulin-like growth factor receptor type 1, IGF-IR)과표체재이선암적발생발전과정중기착중요작용,침대K-ras mRNA화IGF-IR mRNA적반의과핵감산(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN)균가억제이선암세포적증식.본연구지재탐토침대K-ras기인12밀마자점돌변적류대반의과핵감산(K-ras ASODN)연합IGF-IR류대반의과핵감산(IGF-IR ASODN)대인이선암Patu8988세포체내외증식화조망적영향.방법:순서특이인물취합매련반응(polymerase chain reaction using special sequence primers. PCR-SSP)법화기인측서검측Patu8988세포K-ras점돌변형식,근거점돌변형식설계병합성K-ras ASODN.K-ras ASODN화IGF-IR ASODN분별단독화연합작용Patu8988세포후,통과사갑기우담서람(MTT)법、극륭형성실험급투사전경관찰기대Patu8988세포증식급형태결구적영향;류식세포술(FCM)검측K-ras화IGF-IR단백표체화세포조망;RT-PCR검측K-ras화IGF-IR mRNA표체수평;이Patu8988세포건립라서인이선암모형,관찰K-ras ASODN여IGF-IR ASODN연합응용재체내적항종류효과.결과:PCR-SSP법화기인측서검측표명Patu8988세포존재K-ras기인제12밀마자점돌변,기돌변방식위GGT→GTT.2～32 mg/L적K-ras ASODN화2～32 mg/L적IGF-IR ASODN단독응용균능일정정도억제Patu8988세포증식、유도세포조망,량자연합응용교단독응용억제작용경위현저(P<0.01).체내실험표명,K-ras ASODN여IGF-IR ASODN연합응용교단독응용능경유효지억제BALB/c라서이선암적생장(P<0.01).결론:K-ras ASODN화IGF-IF ASODN량충반의과핵감산대인이선암Patu8988세포증식적억제구유협동작용,기궤제가능시연합하조K-ras、IGF-IR단백급K-ras、IGF-IR mRNA표체수평.