中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2009年
1期
16-22
,共7页
梁永刚%刘红雨%刘宝兴%白云%吴蘅%周清华%陈军
樑永剛%劉紅雨%劉寶興%白雲%吳蘅%週清華%陳軍
량영강%류홍우%류보흥%백운%오형%주청화%진군
RNAi%FLJ20420%干扰素反应%干扰素激活基因
RNAi%FLJ20420%榦擾素反應%榦擾素激活基因
RNAi%FLJ20420%간우소반응%간우소격활기인
背景与目的 RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一项针对转录后特异序列基因沉默的技术,可用于调控基因表达和研究基因功能.但该技术引发的非特异效应也越来越受到重视.其中,干扰素反应为RNAi非特异效应的主要类型之一.本文拟探讨在RNA干扰实验中干扰素反应的检测.方法 在A549人肺癌细胞株中应用基因转染技术研究5个不同的FLJ20420 siRNA对FLJ20420基因沉默情况;应用real-time PCR和基因芯片技术相结合,分别检测经2个不同FLJ20420-siRNA干扰后A549细胞中干扰素激活基因(ISGs)表达谱的变化情况.结果 ①在A549细胞中,5个不同的FLJ20420-siRNA可不同程度地埘目的基因起到沉默作用,其中FLJ20420-siRNA-1和FLJ20420-siRNA-4两个的沉默效果最佳,分别为80%和90%;②应用real-time PCR检测与干扰素反应激活相关的16个主要标志性基因发现,A549-FLJ-siRNA-1细胞中有14个基因的表达明显上调;而A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有2个基因的表达变化差异具有显著性,提示在A549-FLJ-siRNA-1细胞中发生了RNAi的非特异性效应;③基因芯片分析发现在A549-FLJ-siRNA-1细胞中有51个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),而在A549-FLJ-siRNA-4细胞中仅有6个干扰素激活基因(ISGs)表达上调2倍以上(P<0.05),从而证实了A549-FLJ-siRNA-1细胞中存在RNAi的非特异性效应干扰素反应.结论 在进行RNAi实验时,siRNA不仅能针对目的基因产生沉默效果,也可同时诱发干扰素反应.应用real-time PCR对于主要的干扰素激活基因(ISGs)的mRNA表达变化的检测将有助于发现RNAi非特异效应干扰素反应.
揹景與目的 RNA榦擾(RNA interference,RNAi)是一項針對轉錄後特異序列基因沉默的技術,可用于調控基因錶達和研究基因功能.但該技術引髮的非特異效應也越來越受到重視.其中,榦擾素反應為RNAi非特異效應的主要類型之一.本文擬探討在RNA榦擾實驗中榦擾素反應的檢測.方法 在A549人肺癌細胞株中應用基因轉染技術研究5箇不同的FLJ20420 siRNA對FLJ20420基因沉默情況;應用real-time PCR和基因芯片技術相結閤,分彆檢測經2箇不同FLJ20420-siRNA榦擾後A549細胞中榦擾素激活基因(ISGs)錶達譜的變化情況.結果 ①在A549細胞中,5箇不同的FLJ20420-siRNA可不同程度地塒目的基因起到沉默作用,其中FLJ20420-siRNA-1和FLJ20420-siRNA-4兩箇的沉默效果最佳,分彆為80%和90%;②應用real-time PCR檢測與榦擾素反應激活相關的16箇主要標誌性基因髮現,A549-FLJ-siRNA-1細胞中有14箇基因的錶達明顯上調;而A549-FLJ-siRNA-4細胞中僅有2箇基因的錶達變化差異具有顯著性,提示在A549-FLJ-siRNA-1細胞中髮生瞭RNAi的非特異性效應;③基因芯片分析髮現在A549-FLJ-siRNA-1細胞中有51箇榦擾素激活基因(ISGs)錶達上調2倍以上(P<0.05),而在A549-FLJ-siRNA-4細胞中僅有6箇榦擾素激活基因(ISGs)錶達上調2倍以上(P<0.05),從而證實瞭A549-FLJ-siRNA-1細胞中存在RNAi的非特異性效應榦擾素反應.結論 在進行RNAi實驗時,siRNA不僅能針對目的基因產生沉默效果,也可同時誘髮榦擾素反應.應用real-time PCR對于主要的榦擾素激活基因(ISGs)的mRNA錶達變化的檢測將有助于髮現RNAi非特異效應榦擾素反應.
배경여목적 RNA간우(RNA interference,RNAi)시일항침대전록후특이서렬기인침묵적기술,가용우조공기인표체화연구기인공능.단해기술인발적비특이효응야월래월수도중시.기중,간우소반응위RNAi비특이효응적주요류형지일.본문의탐토재RNA간우실험중간우소반응적검측.방법 재A549인폐암세포주중응용기인전염기술연구5개불동적FLJ20420 siRNA대FLJ20420기인침묵정황;응용real-time PCR화기인심편기술상결합,분별검측경2개불동FLJ20420-siRNA간우후A549세포중간우소격활기인(ISGs)표체보적변화정황.결과 ①재A549세포중,5개불동적FLJ20420-siRNA가불동정도지시목적기인기도침묵작용,기중FLJ20420-siRNA-1화FLJ20420-siRNA-4량개적침묵효과최가,분별위80%화90%;②응용real-time PCR검측여간우소반응격활상관적16개주요표지성기인발현,A549-FLJ-siRNA-1세포중유14개기인적표체명현상조;이A549-FLJ-siRNA-4세포중부유2개기인적표체변화차이구유현저성,제시재A549-FLJ-siRNA-1세포중발생료RNAi적비특이성효응;③기인심편분석발현재A549-FLJ-siRNA-1세포중유51개간우소격활기인(ISGs)표체상조2배이상(P<0.05),이재A549-FLJ-siRNA-4세포중부유6개간우소격활기인(ISGs)표체상조2배이상(P<0.05),종이증실료A549-FLJ-siRNA-1세포중존재RNAi적비특이성효응간우소반응.결론 재진행RNAi실험시,siRNA불부능침대목적기인산생침묵효과,야가동시유발간우소반응.응용real-time PCR대우주요적간우소격활기인(ISGs)적mRNA표체변화적검측장유조우발현RNAi비특이효응간우소반응.
