安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2009年
4期
415-418
,共4页
王圆圆%廖法学%姚景辉%汪学龙
王圓圓%廖法學%姚景輝%汪學龍
왕원원%료법학%요경휘%왕학룡
目的 制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础.方法 制备十二指肠钩虫成虫粗抗原,经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次,每只鸡每次的免疫剂量为200 μg,初次免疫后28 d进行加强免疫,加强免疫间隔时间为10 d.水稀释法提取卵黄中的IgY,盐析、透析法纯化IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析.ELISA法动态检测抗体效价,观察抗体效价变化.结果 免疫后55 d的每个鸡蛋能提取40~55 mg IgY,经SDS-PAGE和Western blot分析,纯化的IgY有2条主带,分子量分别是35 ku和60 ku,即IgY的轻链和重链.初次免疫后10 d左右出现抗体,至免疫后50~55 d为高峰,效价达到1 ∶ 10 000以上.IgY与人血清抗体均可识别30 ku处钩虫抗原.结论 十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体,为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础.
目的 製備併鑒定特異性抗十二指腸鉤蟲鷄卵黃免疫毬蛋白(IgY),為分析抗鉤蟲IgY抗體的作用奠定基礎.方法 製備十二指腸鉤蟲成蟲粗抗原,經皮下和肌肉註射免疫25週產蛋海蘭母鷄3次,每隻鷄每次的免疫劑量為200 μg,初次免疫後28 d進行加彊免疫,加彊免疫間隔時間為10 d.水稀釋法提取卵黃中的IgY,鹽析、透析法純化IgY,BCA法測定蛋白含量,併進行十二烷基磺痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和Western blot分析.ELISA法動態檢測抗體效價,觀察抗體效價變化.結果 免疫後55 d的每箇鷄蛋能提取40~55 mg IgY,經SDS-PAGE和Western blot分析,純化的IgY有2條主帶,分子量分彆是35 ku和60 ku,即IgY的輕鏈和重鏈.初次免疫後10 d左右齣現抗體,至免疫後50~55 d為高峰,效價達到1 ∶ 10 000以上.IgY與人血清抗體均可識彆30 ku處鉤蟲抗原.結論 十二指腸鉤蟲成蟲粗抗原免疫的海蘭母鷄能產生高濃度、高效價、特異性的IgY抗體,為分析抗鉤蟲IgY抗體的作用奠定瞭基礎.
목적 제비병감정특이성항십이지장구충계란황면역구단백(IgY),위분석항구충IgY항체적작용전정기출.방법 제비십이지장구충성충조항원,경피하화기육주사면역25주산단해란모계3차,매지계매차적면역제량위200 μg,초차면역후28 d진행가강면역,가강면역간격시간위10 d.수희석법제취란황중적IgY,염석、투석법순화IgY,BCA법측정단백함량,병진행십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화Western blot분석.ELISA법동태검측항체효개,관찰항체효개변화.결과 면역후55 d적매개계단능제취40~55 mg IgY,경SDS-PAGE화Western blot분석,순화적IgY유2조주대,분자량분별시35 ku화60 ku,즉IgY적경련화중련.초차면역후10 d좌우출현항체,지면역후50~55 d위고봉,효개체도1 ∶ 10 000이상.IgY여인혈청항체균가식별30 ku처구충항원.결론 십이지장구충성충조항원면역적해란모계능산생고농도、고효개、특이성적IgY항체,위분석항구충IgY항체적작용전정료기출.
