岭南现代临床外科
嶺南現代臨床外科
령남현대림상외과
LINGNAN MODERN CLINICS IN SURGERY
2009年
5期
331-334
,共4页
杨平%曹杰%钱跃军%彭燕%孙政%李旺林%王强
楊平%曹傑%錢躍軍%彭燕%孫政%李旺林%王彊
양평%조걸%전약군%팽연%손정%리왕림%왕강
脆性组氨酸三联体%真核表达载体%基因克隆
脆性組氨痠三聯體%真覈錶達載體%基因剋隆
취성조안산삼련체%진핵표체재체%기인극륭
目的 克隆人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因,构建其真核表达质粒pRcCMV-FHIT.方法 提取人外周血总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增人FHIT cDNA全长开放阅读框序列,PCR产物与中间载体pGEM-T连接后转化到大肠杆菌DH5α,然后对单菌落进行菌落PCR、限制性内切酶酶切鉴定和测序.用EcoR Ⅰ将目的片段切下,插入真核表达载体pRc/CMV2的相应位点.构建表达质粒pRc/CMV2-FHIT,将该重组质粒转化到大肠杆菌DIL5α后进行菌落PCR、酶切鉴定.结果 测序结果表明从正常人外周血单个核细胞中所获得的FHITcDNA含有781个碱基,与Genbank(NM_002012.1)序列完全一致.pRc/CMV2-FHIT经酶切鉴定与预期结果一致.结论 成功构建重组真核表达质粒pRcCMV-FHIT,为进一步研究脂质体转染FHIT基因对结肠癌细胞株SW480凋亡作用的影响奠定基础.
目的 剋隆人脆性組氨痠三聯體(FHIT)基因,構建其真覈錶達質粒pRcCMV-FHIT.方法 提取人外週血總RNA,用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)技術擴增人FHIT cDNA全長開放閱讀框序列,PCR產物與中間載體pGEM-T連接後轉化到大腸桿菌DH5α,然後對單菌落進行菌落PCR、限製性內切酶酶切鑒定和測序.用EcoR Ⅰ將目的片段切下,插入真覈錶達載體pRc/CMV2的相應位點.構建錶達質粒pRc/CMV2-FHIT,將該重組質粒轉化到大腸桿菌DIL5α後進行菌落PCR、酶切鑒定.結果 測序結果錶明從正常人外週血單箇覈細胞中所穫得的FHITcDNA含有781箇堿基,與Genbank(NM_002012.1)序列完全一緻.pRc/CMV2-FHIT經酶切鑒定與預期結果一緻.結論 成功構建重組真覈錶達質粒pRcCMV-FHIT,為進一步研究脂質體轉染FHIT基因對結腸癌細胞株SW480凋亡作用的影響奠定基礎.
목적 극륭인취성조안산삼련체(FHIT)기인,구건기진핵표체질립pRcCMV-FHIT.방법 제취인외주혈총RNA,용역전록-취합매련반응(RT-PCR)기술확증인FHIT cDNA전장개방열독광서렬,PCR산물여중간재체pGEM-T련접후전화도대장간균DH5α,연후대단균락진행균락PCR、한제성내절매매절감정화측서.용EcoR Ⅰ장목적편단절하,삽입진핵표체재체pRc/CMV2적상응위점.구건표체질립pRc/CMV2-FHIT,장해중조질립전화도대장간균DIL5α후진행균락PCR、매절감정.결과 측서결과표명종정상인외주혈단개핵세포중소획득적FHITcDNA함유781개감기,여Genbank(NM_002012.1)서렬완전일치.pRc/CMV2-FHIT경매절감정여예기결과일치.결론 성공구건중조진핵표체질립pRcCMV-FHIT,위진일보연구지질체전염FHIT기인대결장암세포주SW480조망작용적영향전정기출.
