陕西医学杂志
陝西醫學雜誌
협서의학잡지
SHAANXI MEDICAL JOURNAL
2011年
3期
259-261,279
,共4页
NF-κB/分析%@凝胶迁移分析实验%DNA探针/利用
NF-κB/分析%@凝膠遷移分析實驗%DNA探針/利用
NF-κB/분석%@응효천이분석실험%DNA탐침/이용
目的:探讨地高辛标记DNA探针和凝胶迁移分析法测定NF-κB激活的优势.方法:用地高辛标记NF-κB基序DNA探针,检测标记效率,探针与核蛋白的结合反应产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳、转膜,高温干燥后,与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体杂交,加入CSPD检测化学发光强度.结果:按照上述方法标记DNA探针,标记效率较高.样品核蛋白与地高辛标记的NF-κB基序DNA探针共同孵育,两者相互结合,进行凝胶迁移分析,出现高密度的迁移带.在反应体系中额外加入过量未标记的NF-κB基序DNA探针或抗NF-κB/P65或NF-κB/P50抗体后,抑制了两者的结合,迁移带消失,而加入过量未标记的Oct2A基序DNA探针,不能抑制两者结合,迁移带密度无明显降低,证实了核蛋白NF-κB与DNA探针结合的特异性.结论:本方法无放射性污染,无需特殊设备,操作简便、稳定性好、敏感性强,图像清晰、背景低.
目的:探討地高辛標記DNA探針和凝膠遷移分析法測定NF-κB激活的優勢.方法:用地高辛標記NF-κB基序DNA探針,檢測標記效率,探針與覈蛋白的結閤反應產物經過聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉膜,高溫榦燥後,與堿性燐痠酶標記的抗地高辛抗體雜交,加入CSPD檢測化學髮光彊度.結果:按照上述方法標記DNA探針,標記效率較高.樣品覈蛋白與地高辛標記的NF-κB基序DNA探針共同孵育,兩者相互結閤,進行凝膠遷移分析,齣現高密度的遷移帶.在反應體繫中額外加入過量未標記的NF-κB基序DNA探針或抗NF-κB/P65或NF-κB/P50抗體後,抑製瞭兩者的結閤,遷移帶消失,而加入過量未標記的Oct2A基序DNA探針,不能抑製兩者結閤,遷移帶密度無明顯降低,證實瞭覈蛋白NF-κB與DNA探針結閤的特異性.結論:本方法無放射性汙染,無需特殊設備,操作簡便、穩定性好、敏感性彊,圖像清晰、揹景低.
목적:탐토지고신표기DNA탐침화응효천이분석법측정NF-κB격활적우세.방법:용지고신표기NF-κB기서DNA탐침,검측표기효솔,탐침여핵단백적결합반응산물경과취병희선알응효전영、전막,고온간조후,여감성린산매표기적항지고신항체잡교,가입CSPD검측화학발광강도.결과:안조상술방법표기DNA탐침,표기효솔교고.양품핵단백여지고신표기적NF-κB기서DNA탐침공동부육,량자상호결합,진행응효천이분석,출현고밀도적천이대.재반응체계중액외가입과량미표기적NF-κB기서DNA탐침혹항NF-κB/P65혹NF-κB/P50항체후,억제료량자적결합,천이대소실,이가입과량미표기적Oct2A기서DNA탐침,불능억제량자결합,천이대밀도무명현강저,증실료핵단백NF-κB여DNA탐침결합적특이성.결론:본방법무방사성오염,무수특수설비,조작간편、은정성호、민감성강,도상청석、배경저.
