林业科学研究
林業科學研究
임업과학연구
FOREST RESEARCH
2011年
2期
194-199
,共6页
姜荣波%姜景民%刘军%陈益泰%栾启福%岳华峰
薑榮波%薑景民%劉軍%陳益泰%欒啟福%嶽華峰
강영파%강경민%류군%진익태%란계복%악화봉
红楠%ISSR-PCR反应体系%单因子试验%正交设计
紅楠%ISSR-PCR反應體繫%單因子試驗%正交設計
홍남%ISSR-PCR반응체계%단인자시험%정교설계
为建立稳定的红楠ISSR-PER最佳反应体系,在探索红楠基因组DNA提取的基础上,利用单因子试验和正交试验设计对反应体系进行优化.首先采用单因子试验对Mg2+、引物、模板DNA、dNTPs的不同浓度水平进行优化,找出ISSR-PCR反应各因素的最佳浓度;同时为进一步增加结果的可靠性,采用正交试验设计方法[L9(34)]对Mg2+、引物、模板DNA、dNTPs 4个因素3个浓度水平进行优化和筛选.综合两种试验方法结果,最终获得了红楠ISSR-PCR最佳反应体系:反应体系为20μL,Taq酶0.05 U·μL-1,Mg2+2.0 mmol·L-1,模板DNA 1 ng·L-1,dNTPs 0.3 mmol·L-1,引物(835)0.5 μmol·L-11×PCR缓冲液.建立重复性好、稳定性优良的ISSR-PCR反应体系,为下一步红楠群体遗传结构和遗传变异研究提供了技术支持.
為建立穩定的紅楠ISSR-PER最佳反應體繫,在探索紅楠基因組DNA提取的基礎上,利用單因子試驗和正交試驗設計對反應體繫進行優化.首先採用單因子試驗對Mg2+、引物、模闆DNA、dNTPs的不同濃度水平進行優化,找齣ISSR-PCR反應各因素的最佳濃度;同時為進一步增加結果的可靠性,採用正交試驗設計方法[L9(34)]對Mg2+、引物、模闆DNA、dNTPs 4箇因素3箇濃度水平進行優化和篩選.綜閤兩種試驗方法結果,最終穫得瞭紅楠ISSR-PCR最佳反應體繫:反應體繫為20μL,Taq酶0.05 U·μL-1,Mg2+2.0 mmol·L-1,模闆DNA 1 ng·L-1,dNTPs 0.3 mmol·L-1,引物(835)0.5 μmol·L-11×PCR緩遲液.建立重複性好、穩定性優良的ISSR-PCR反應體繫,為下一步紅楠群體遺傳結構和遺傳變異研究提供瞭技術支持.
위건립은정적홍남ISSR-PER최가반응체계,재탐색홍남기인조DNA제취적기출상,이용단인자시험화정교시험설계대반응체계진행우화.수선채용단인자시험대Mg2+、인물、모판DNA、dNTPs적불동농도수평진행우화,조출ISSR-PCR반응각인소적최가농도;동시위진일보증가결과적가고성,채용정교시험설계방법[L9(34)]대Mg2+、인물、모판DNA、dNTPs 4개인소3개농도수평진행우화화사선.종합량충시험방법결과,최종획득료홍남ISSR-PCR최가반응체계:반응체계위20μL,Taq매0.05 U·μL-1,Mg2+2.0 mmol·L-1,모판DNA 1 ng·L-1,dNTPs 0.3 mmol·L-1,인물(835)0.5 μmol·L-11×PCR완충액.건립중복성호、은정성우량적ISSR-PCR반응체계,위하일보홍남군체유전결구화유전변이연구제공료기술지지.
