南京理工大学学报（自然科学版）
南京理工大學學報（自然科學版）
남경리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011年
2期
268-272
,共5页
乳酸片球菌素%大肠杆菌%融合蛋白%表达%纯化
乳痠片毬菌素%大腸桿菌%融閤蛋白%錶達%純化
유산편구균소%대장간균%융합단백%표체%순화
为在大肠杆菌中高效表达乳酸片球菌素(PED),按照美国国立生物技术信息中心公布的PED基因序列设计合成引物,以乳酸片球菌基因组DNA为模板,用多聚酶链式反应扩增PED结构基因特异片段,构建编码组氨酸标记硫氧还原蛋白融合PED的重组表达质粒pET32c-PED,并转化大肠杆菌BL21(DE3).在异丙基硫代半乳糖苷诱导后融合蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的28%.经镍亲合层析纯化的融合蛋白用肠激酶裂解,再经超滤纯化,可得78%的收率.融合蛋白没有抗粪肠球菌细菌素活性,被分开的PED恢复了抑菌活性.
為在大腸桿菌中高效錶達乳痠片毬菌素(PED),按照美國國立生物技術信息中心公佈的PED基因序列設計閤成引物,以乳痠片毬菌基因組DNA為模闆,用多聚酶鏈式反應擴增PED結構基因特異片段,構建編碼組氨痠標記硫氧還原蛋白融閤PED的重組錶達質粒pET32c-PED,併轉化大腸桿菌BL21(DE3).在異丙基硫代半乳糖苷誘導後融閤蛋白以包涵體形式錶達,錶達量佔菌體總蛋白的28%.經鎳親閤層析純化的融閤蛋白用腸激酶裂解,再經超濾純化,可得78%的收率.融閤蛋白沒有抗糞腸毬菌細菌素活性,被分開的PED恢複瞭抑菌活性.
위재대장간균중고효표체유산편구균소(PED),안조미국국립생물기술신식중심공포적PED기인서렬설계합성인물,이유산편구균기인조DNA위모판,용다취매련식반응확증PED결구기인특이편단,구건편마조안산표기류양환원단백융합PED적중조표체질립pET32c-PED,병전화대장간균BL21(DE3).재이병기류대반유당감유도후융합단백이포함체형식표체,표체량점균체총단백적28%.경얼친합층석순화적융합단백용장격매렬해,재경초려순화,가득78%적수솔.융합단백몰유항분장구균세균소활성,피분개적PED회복료억균활성.
