浙江大学学报(医学版)
浙江大學學報(醫學版)
절강대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2005年
1期
33-37,42
,共6页
严杰%钊守凤%毛亚飞%阮萍%罗依惠%李淑萍%李立伟
嚴傑%釗守鳳%毛亞飛%阮萍%囉依惠%李淑萍%李立偉
엄걸%쇠수봉%모아비%원평%라의혜%리숙평%리립위
钩端螺旋体,问号%lipL32/1基因%ompL1/1基因%序列同源性,核酸%序列同源性,氨基酸%真核表达%克隆,分子%lipL32/1-ompL1/1融合基因/免疫学
鉤耑螺鏇體,問號%lipL32/1基因%ompL1/1基因%序列同源性,覈痠%序列同源性,氨基痠%真覈錶達%剋隆,分子%lipL32/1-ompL1/1融閤基因/免疫學
구단라선체,문호%lipL32/1기인%ompL1/1기인%서렬동원성,핵산%서렬동원성,안기산%진핵표체%극륭,분자%lipL32/1-ompL1/1융합기인/면역학
目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)的融合基因lipL32/1-ompL1/1真核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性.方法:采用连接引物PCR构建融合基因lipL32/1-ompL1/1,克隆测序后构建lipL32/1-ompL1/1的毕赤酵母真核表达系统pPIC9K-lipL32/1-ompL1/1-P.pastorisGS115.用MM和MD平板分离His+ Mut+型菌落,YPD平板筛选出G418高抗性的His+ Mut+ 转化子.以酵母裂解酶处理的高拷贝转化子His+ Mut+克隆裂解产物为模板,5'AOX1和3'AOX1为引物,用PCR检测所构建的毕赤酵母工程菌株染色体DNA中的目的融合基因.在BMMY培养基中用甲醇诱导目的重组蛋白rLipL32/1-rOmpL1/1表达.采用硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析提纯培养物上清液中的rLipL32/1-rOmpL1/1.采用SDS-PAGE和Western blot分别检测rLipL32/1-rOmpL1/1的产量及其免疫反应性.结果:获得的lipL32/1-ompL1/1融合基因约为1 794 bp.其核苷酸和氨基酸序列与原始lipL32/1和ompL1/1基因型比较,相似性分别高达99.94%和100%.所构建的真核表达系统可分泌rLipL32/1-rOmpL1/1,SDS-PAGE后位于预期位置处,产量约占上清总蛋白的40%.rLipL32/1和rOmpL1/1兔抗血清均能与表达的rLipL32/1-rOmpL1/1结合.结论:本研究成功地构建了钩体lipL32/1-ompL1/1融合基因高效毕赤酵母真核表达系统,所表达的融合蛋白具有特异的免疫反应性,可作为研制钩体新疫苗的候选抗原.
目的:構建問號鉤耑螺鏇體(簡稱鉤體)的融閤基因lipL32/1-ompL1/1真覈錶達繫統併鑒定錶達產物的免疫反應性.方法:採用連接引物PCR構建融閤基因lipL32/1-ompL1/1,剋隆測序後構建lipL32/1-ompL1/1的畢赤酵母真覈錶達繫統pPIC9K-lipL32/1-ompL1/1-P.pastorisGS115.用MM和MD平闆分離His+ Mut+型菌落,YPD平闆篩選齣G418高抗性的His+ Mut+ 轉化子.以酵母裂解酶處理的高拷貝轉化子His+ Mut+剋隆裂解產物為模闆,5'AOX1和3'AOX1為引物,用PCR檢測所構建的畢赤酵母工程菌株染色體DNA中的目的融閤基因.在BMMY培養基中用甲醇誘導目的重組蛋白rLipL32/1-rOmpL1/1錶達.採用硫痠銨沉澱,Ni-NTA親和層析提純培養物上清液中的rLipL32/1-rOmpL1/1.採用SDS-PAGE和Western blot分彆檢測rLipL32/1-rOmpL1/1的產量及其免疫反應性.結果:穫得的lipL32/1-ompL1/1融閤基因約為1 794 bp.其覈苷痠和氨基痠序列與原始lipL32/1和ompL1/1基因型比較,相似性分彆高達99.94%和100%.所構建的真覈錶達繫統可分泌rLipL32/1-rOmpL1/1,SDS-PAGE後位于預期位置處,產量約佔上清總蛋白的40%.rLipL32/1和rOmpL1/1兔抗血清均能與錶達的rLipL32/1-rOmpL1/1結閤.結論:本研究成功地構建瞭鉤體lipL32/1-ompL1/1融閤基因高效畢赤酵母真覈錶達繫統,所錶達的融閤蛋白具有特異的免疫反應性,可作為研製鉤體新疫苗的候選抗原.
목적:구건문호구단라선체(간칭구체)적융합기인lipL32/1-ompL1/1진핵표체계통병감정표체산물적면역반응성.방법:채용련접인물PCR구건융합기인lipL32/1-ompL1/1,극륭측서후구건lipL32/1-ompL1/1적필적효모진핵표체계통pPIC9K-lipL32/1-ompL1/1-P.pastorisGS115.용MM화MD평판분리His+ Mut+형균락,YPD평판사선출G418고항성적His+ Mut+ 전화자.이효모렬해매처리적고고패전화자His+ Mut+극륭렬해산물위모판,5'AOX1화3'AOX1위인물,용PCR검측소구건적필적효모공정균주염색체DNA중적목적융합기인.재BMMY배양기중용갑순유도목적중조단백rLipL32/1-rOmpL1/1표체.채용류산안침정,Ni-NTA친화층석제순배양물상청액중적rLipL32/1-rOmpL1/1.채용SDS-PAGE화Western blot분별검측rLipL32/1-rOmpL1/1적산량급기면역반응성.결과:획득적lipL32/1-ompL1/1융합기인약위1 794 bp.기핵감산화안기산서렬여원시lipL32/1화ompL1/1기인형비교,상사성분별고체99.94%화100%.소구건적진핵표체계통가분비rLipL32/1-rOmpL1/1,SDS-PAGE후위우예기위치처,산량약점상청총단백적40%.rLipL32/1화rOmpL1/1토항혈청균능여표체적rLipL32/1-rOmpL1/1결합.결론:본연구성공지구건료구체lipL32/1-ompL1/1융합기인고효필적효모진핵표체계통,소표체적융합단백구유특이적면역반응성,가작위연제구체신역묘적후선항원.
