中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
24期
4668-4672
,共5页
丁浩%李菊香%洪葵%万磊%夏子荣%颜素娟%罗伟%程晓曙%吴清华%苏海%吴延庆
丁浩%李菊香%洪葵%萬磊%夏子榮%顏素娟%囉偉%程曉曙%吳清華%囌海%吳延慶
정호%리국향%홍규%만뢰%하자영%안소연%라위%정효서%오청화%소해%오연경
细胞信号转导抑制因子1%内皮细胞%siRNA
細胞信號轉導抑製因子1%內皮細胞%siRNA
세포신호전도억제인자1%내피세포%siRNA
背景:利用RNAi技术引发细胞因子信号转导抑制因子1沉默可促进神经内分泌肿瘤细胞的凋亡,然而对于内皮细胞是否有类似的作用,目前尚不清楚.目的:实验拟验证内皮细胞中是否有细胞因子信号转导抑制因子1表达,并在所设计的siRNA中,筛选出1对对细胞因子信号转导抑制因子1沉默效率最高的siRNA.设计、时间及地点:随机对照,体外细胞学实验,于2007-12/2008-06在南昌大学医学院第二附属医院所属的江西省分子医学重点实验室完成.材料:人脐静脉内皮细胞由南京凯基生物公司提供.方法:设计并化学合成4对靶向细胞因子信号转导抑制因子1的siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4.培养人脐静脉内皮细胞,利用RT-PCR检测人脐静脉内皮细胞是否有细胞信号转导抑制因子1表达.将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25,50,75,100 nmol/L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光倒置显微镜下观察转染效率,对比得出有最佳转染效率的浓度.然后,实验根据不同的处理因素分成8组:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组4个对照组.将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48 h后提取RNA.主要观察指标:利用RT-PCR测定细胞因子信号转导抑制因子1 mRNA的相对表达水平.结果:人脐静脉内皮细胞高表达细胞因子信号转导抑制因子1.siRNA在50 nmol/L时有较高的转染效率.4对siRNA干扰后,细胞因子信号转导抑制因子1 mRNA的表达水平与阴性对照、转染试剂组和空白对照组相比明显下调(P＜0.05),与阳性对照组相比显著下调(P＜0.01),其中siRNA-3的沉默效率最高(P＜0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组与阳性对照组相比明显下调(P＜0.05),阴性对照、转染试剂组和空白对照组之间差异无显著性意义(P＞0.05).结论:内皮细胞中存在细胞因子信号转导抑制因子1表达.RNAi抑制细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中的表达,实验筛选出1对沉默效率最高的siRNA.
揹景:利用RNAi技術引髮細胞因子信號轉導抑製因子1沉默可促進神經內分泌腫瘤細胞的凋亡,然而對于內皮細胞是否有類似的作用,目前尚不清楚.目的:實驗擬驗證內皮細胞中是否有細胞因子信號轉導抑製因子1錶達,併在所設計的siRNA中,篩選齣1對對細胞因子信號轉導抑製因子1沉默效率最高的siRNA.設計、時間及地點:隨機對照,體外細胞學實驗,于2007-12/2008-06在南昌大學醫學院第二附屬醫院所屬的江西省分子醫學重點實驗室完成.材料:人臍靜脈內皮細胞由南京凱基生物公司提供.方法:設計併化學閤成4對靶嚮細胞因子信號轉導抑製因子1的siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4.培養人臍靜脈內皮細胞,利用RT-PCR檢測人臍靜脈內皮細胞是否有細胞信號轉導抑製因子1錶達.將帶有熒光標記的陰性對照siRNA配製成25,50,75,100 nmol/L的4組,利用脂質體轉染細胞,併在熒光倒置顯微鏡下觀察轉染效率,對比得齣有最佳轉染效率的濃度.然後,實驗根據不同的處理因素分成8組:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和暘性對照組、陰性對照組、轉染試劑組、空白對照組4箇對照組.將均為有最佳轉染效率濃度的各組siRNA轉染細胞,48 h後提取RNA.主要觀察指標:利用RT-PCR測定細胞因子信號轉導抑製因子1 mRNA的相對錶達水平.結果:人臍靜脈內皮細胞高錶達細胞因子信號轉導抑製因子1.siRNA在50 nmol/L時有較高的轉染效率.4對siRNA榦擾後,細胞因子信號轉導抑製因子1 mRNA的錶達水平與陰性對照、轉染試劑組和空白對照組相比明顯下調(P＜0.05),與暘性對照組相比顯著下調(P＜0.01),其中siRNA-3的沉默效率最高(P＜0.05),陰性對照、轉染試劑組和空白對照組與暘性對照組相比明顯下調(P＜0.05),陰性對照、轉染試劑組和空白對照組之間差異無顯著性意義(P＞0.05).結論:內皮細胞中存在細胞因子信號轉導抑製因子1錶達.RNAi抑製細胞因子信號轉導抑製因子1在內皮細胞中的錶達,實驗篩選齣1對沉默效率最高的siRNA.
배경:이용RNAi기술인발세포인자신호전도억제인자1침묵가촉진신경내분비종류세포적조망,연이대우내피세포시부유유사적작용,목전상불청초.목적:실험의험증내피세포중시부유세포인자신호전도억제인자1표체,병재소설계적siRNA중,사선출1대대세포인자신호전도억제인자1침묵효솔최고적siRNA.설계、시간급지점:수궤대조,체외세포학실험,우2007-12/2008-06재남창대학의학원제이부속의원소속적강서성분자의학중점실험실완성.재료:인제정맥내피세포유남경개기생물공사제공.방법:설계병화학합성4대파향세포인자신호전도억제인자1적siRNA:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4.배양인제정맥내피세포,이용RT-PCR검측인제정맥내피세포시부유세포신호전도억제인자1표체.장대유형광표기적음성대조siRNA배제성25,50,75,100 nmol/L적4조,이용지질체전염세포,병재형광도치현미경하관찰전염효솔,대비득출유최가전염효솔적농도.연후,실험근거불동적처리인소분성8조:siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4화양성대조조、음성대조조、전염시제조、공백대조조4개대조조.장균위유최가전염효솔농도적각조siRNA전염세포,48 h후제취RNA.주요관찰지표:이용RT-PCR측정세포인자신호전도억제인자1 mRNA적상대표체수평.결과:인제정맥내피세포고표체세포인자신호전도억제인자1.siRNA재50 nmol/L시유교고적전염효솔.4대siRNA간우후,세포인자신호전도억제인자1 mRNA적표체수평여음성대조、전염시제조화공백대조조상비명현하조(P＜0.05),여양성대조조상비현저하조(P＜0.01),기중siRNA-3적침묵효솔최고(P＜0.05),음성대조、전염시제조화공백대조조여양성대조조상비명현하조(P＜0.05),음성대조、전염시제조화공백대조조지간차이무현저성의의(P＞0.05).결론:내피세포중존재세포인자신호전도억제인자1표체.RNAi억제세포인자신호전도억제인자1재내피세포중적표체,실험사선출1대침묵효솔최고적siRNA.
