化学与生物工程
化學與生物工程
화학여생물공정
CHEMISTRY & BIOENGINEERING
2011年
7期
29-34
,共6页
陈苗苗%林良才%马昱澍%王风清%魏东芝
陳苗苗%林良纔%馬昱澍%王風清%魏東芝
진묘묘%림량재%마욱주%왕풍청%위동지
烟曲霉%烟曲霉酸%3-甾酮-1-脱氢酶%雄甾-4-烯-3,17-二酮%雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮
煙麯黴%煙麯黴痠%3-甾酮-1-脫氫酶%雄甾-4-烯-3,17-二酮%雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮
연곡매%연곡매산%3-치동-1-탈경매%웅치-4-희-3,17-이동%웅치-1,4-이희-3,17-이동
微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型.以烟曲霉(A.fumigatus)为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列.该基因与玫瑰色热微菌(Thermomicrobium roseum)DSM5159的kstD一致性为51%.构建pET28a(+)-kstDF表达载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (λDE3),获得高表达重组子菌株.经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析,发现高温(37℃)有利于KstDF蛋白表达,低温(20℃)有利于酶活的保持.该重组菌显示出良好的甾体转化能力,在12h内完全转化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,为构建高效转化3-酮基-4-烯类固醇的基因工程菌奠定了基础.
微生物轉化在甾體藥物閤成中起著不可替代的作用,其中C1,2位脫氫是最為重要的反應類型.以煙麯黴(A.fumigatus)為齣髮菌株,運用同源序列比對從煙麯黴痠基因簇中釣取齣kstDF序列.該基因與玫瑰色熱微菌(Thermomicrobium roseum)DSM5159的kstD一緻性為51%.構建pET28a(+)-kstDF錶達載體,轉化大腸桿菌(Escherichia coli) BL21 (λDE3),穫得高錶達重組子菌株.經IPTG誘導、SDS-PAGE電泳分析,髮現高溫(37℃)有利于KstDF蛋白錶達,低溫(20℃)有利于酶活的保持.該重組菌顯示齣良好的甾體轉化能力,在12h內完全轉化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,為構建高效轉化3-酮基-4-烯類固醇的基因工程菌奠定瞭基礎.
미생물전화재치체약물합성중기착불가체대적작용,기중C1,2위탈경시최위중요적반응류형.이연곡매(A.fumigatus)위출발균주,운용동원서렬비대종연곡매산기인족중조취출kstDF서렬.해기인여매괴색열미균(Thermomicrobium roseum)DSM5159적kstD일치성위51%.구건pET28a(+)-kstDF표체재체,전화대장간균(Escherichia coli) BL21 (λDE3),획득고표체중조자균주.경IPTG유도、SDS-PAGE전영분석,발현고온(37℃)유리우KstDF단백표체,저온(20℃)유리우매활적보지.해중조균현시출량호적치체전화능력,재12h내완전전화13.3 mg.L-1웅치-4-희-3,17-이동,위구건고효전화3-동기-4-희류고순적기인공정균전정료기출.
