蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2012年
1期
51-59
,共9页
于威%谢磊%陈剑清%舒特俊%聂作明%全滟平%李司%张耀洲
于威%謝磊%陳劍清%舒特俊%聶作明%全滟平%李司%張耀洲
우위%사뢰%진검청%서특준%섭작명%전염평%리사%장요주
家蚕膜蛋白基因BmTmC27%序列特征%转录%原核表达%互作蛋白
傢蠶膜蛋白基因BmTmC27%序列特徵%轉錄%原覈錶達%互作蛋白
가잠막단백기인BmTmC27%서렬특정%전록%원핵표체%호작단백
从家蚕蛹cDNA文库中筛选获得一条家蚕膜蛋白基因序列,通过编码氨基酸序列的同源性比对表明其可能是家蚕的未知功能序列,命名为BmTmC27(GenBank登录号:DY231073.1).生物信息学分析结果表明该基因全长833 bp,由558 bp的开放阅读框、102 bp的5'端非翻译区和173 bp的3'端非翻译区组成,编码蛋白由185个氨基酸组成且合有4个跨膜区,预测蛋白分子质量为20.94 kD,等电点为7.38.将该基因片段与BmNPV的polh基因连接后克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核融合表达载体pGEX-4T-1 -polh-BmTmC27,经IPTG诱导、SDS-PAGE分析表明目的蛋白以包涵体形式在E.coli BL21( DE3)中表达.利用多角体蛋白可溶于碱性环境的性质,采用调节pH值的方法纯化融合表达的重组蛋白GST-Polh-BmTmC27,然后经TEV酶消化获得BmTmC27蛋白.荧光定量PCR分析BmTmC27在家蚕5龄幼虫不同组织中的表达存在明显差异,其中在脂肪体、中肠和气管中的转录水平较高.利用GST沉降技术研究了BmTmC27的互作蛋白,与对照组相比,发现了4条特异性互作蛋白条带.研究结果有助于进一步探究BmTmC27的生物学功能,也为膜蛋白的表达和纯化提供了一种新方法.
從傢蠶蛹cDNA文庫中篩選穫得一條傢蠶膜蛋白基因序列,通過編碼氨基痠序列的同源性比對錶明其可能是傢蠶的未知功能序列,命名為BmTmC27(GenBank登錄號:DY231073.1).生物信息學分析結果錶明該基因全長833 bp,由558 bp的開放閱讀框、102 bp的5'耑非翻譯區和173 bp的3'耑非翻譯區組成,編碼蛋白由185箇氨基痠組成且閤有4箇跨膜區,預測蛋白分子質量為20.94 kD,等電點為7.38.將該基因片段與BmNPV的polh基因連接後剋隆到原覈錶達載體pGEX-4T-1中,構建原覈融閤錶達載體pGEX-4T-1 -polh-BmTmC27,經IPTG誘導、SDS-PAGE分析錶明目的蛋白以包涵體形式在E.coli BL21( DE3)中錶達.利用多角體蛋白可溶于堿性環境的性質,採用調節pH值的方法純化融閤錶達的重組蛋白GST-Polh-BmTmC27,然後經TEV酶消化穫得BmTmC27蛋白.熒光定量PCR分析BmTmC27在傢蠶5齡幼蟲不同組織中的錶達存在明顯差異,其中在脂肪體、中腸和氣管中的轉錄水平較高.利用GST沉降技術研究瞭BmTmC27的互作蛋白,與對照組相比,髮現瞭4條特異性互作蛋白條帶.研究結果有助于進一步探究BmTmC27的生物學功能,也為膜蛋白的錶達和純化提供瞭一種新方法.
종가잠용cDNA문고중사선획득일조가잠막단백기인서렬,통과편마안기산서렬적동원성비대표명기가능시가잠적미지공능서렬,명명위BmTmC27(GenBank등록호:DY231073.1).생물신식학분석결과표명해기인전장833 bp,유558 bp적개방열독광、102 bp적5'단비번역구화173 bp적3'단비번역구조성,편마단백유185개안기산조성차합유4개과막구,예측단백분자질량위20.94 kD,등전점위7.38.장해기인편단여BmNPV적polh기인련접후극륭도원핵표체재체pGEX-4T-1중,구건원핵융합표체재체pGEX-4T-1 -polh-BmTmC27,경IPTG유도、SDS-PAGE분석표명목적단백이포함체형식재E.coli BL21( DE3)중표체.이용다각체단백가용우감성배경적성질,채용조절pH치적방법순화융합표체적중조단백GST-Polh-BmTmC27,연후경TEV매소화획득BmTmC27단백.형광정량PCR분석BmTmC27재가잠5령유충불동조직중적표체존재명현차이,기중재지방체、중장화기관중적전록수평교고.이용GST침강기술연구료BmTmC27적호작단백,여대조조상비,발현료4조특이성호작단백조대.연구결과유조우진일보탐구BmTmC27적생물학공능,야위막단백적표체화순화제공료일충신방법.
