解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2006年
1期
38-41
,共4页
陈陵%蔡永国%郑兴春%杨仕明%房殿春%罗元辉%王东旭
陳陵%蔡永國%鄭興春%楊仕明%房殿春%囉元輝%王東旭
진릉%채영국%정흥춘%양사명%방전춘%라원휘%왕동욱
肝素酶%腺病毒科%复制缺陷型腺病毒载体%转染
肝素酶%腺病毒科%複製缺陷型腺病毒載體%轉染
간소매%선병독과%복제결함형선병독재체%전염
目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-hpa).方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315-hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-hpa,并大量扩增,收集纯化.对纯化后的Ad-hpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml.电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制.PCR双引物鉴定Ad-hpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段.结论成功包装了负盘.
目的包裝負載人肝素酶(hpa)全長cDNA的複製缺陷型腺病毒載體(Ad-hpa).方法將肝素酶正義腺病毒穿梭質粒pDC315-hpa與腺病毒包裝質粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共轉染人胚腎293細胞(HEK293),包裝Ad-hpa,併大量擴增,收集純化.對純化後的Ad-hpa進行滴度測定、感染性鑒定、電鏡鑒定及雙引物PCR鑒定.結果包裝成功的腺病毒載體具有良好的感染性,純化濃縮後的病毒滴度可達5×1010pfu/ml.電鏡證實病毒濃縮液中存在病毒顆粒,併可見病毒在HEK293細胞中複製.PCR雙引物鑒定Ad-hpa可擴增齣Ad及hpa特異片段,而對照則不能擴增齣hpa片段.結論成功包裝瞭負盤.
목적포장부재인간소매(hpa)전장cDNA적복제결함형선병독재체(Ad-hpa).방법장간소매정의선병독천사질립pDC315-hpa여선병독포장질립pBHGloxDeltaE1,3Cre공전염인배신293세포(HEK293),포장Ad-hpa,병대량확증,수집순화.대순화후적Ad-hpa진행적도측정、감염성감정、전경감정급쌍인물PCR감정.결과포장성공적선병독재체구유량호적감염성,순화농축후적병독적도가체5×1010pfu/ml.전경증실병독농축액중존재병독과립,병가견병독재HEK293세포중복제.PCR쌍인물감정Ad-hpa가확증출Ad급hpa특이편단,이대조칙불능확증출hpa편단.결론성공포장료부반.
