临床检验杂志
臨床檢驗雜誌
림상검험잡지
2007年
1期
13-16
,共4页
郑德柱%兰风华%黄粱浒%吴玉水%谢飞%程烽%朱忠勇
鄭德柱%蘭風華%黃粱滸%吳玉水%謝飛%程烽%硃忠勇
정덕주%란풍화%황량호%오옥수%사비%정봉%주충용
NADH-细胞色素b5还原酶%原核表达%GST融合蛋白%亲和层析
NADH-細胞色素b5還原酶%原覈錶達%GST融閤蛋白%親和層析
NADH-세포색소b5환원매%원핵표체%GST융합단백%친화층석
目的 探讨NADH-细胞色素b5还原酶基因突变引起遗传性高铁血红蛋白血症的分子病理机制,研究突变型(b5R)蛋白结构和功能的关系.方法 用基因重组技术将野生型和突变型(L72P)b5R cDNA克隆于pGEX-2T载体,在大肠杆茵BL21中诱导表达.Western印迹鉴定表达的蛋白为GST-b5R融合蛋白.应用谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析,还原型谷胱甘肽洗脱得到纯化的GST-b5R和GST-b5R L72P融合蛋白,比较GST-b5R和GST-b5R L72P酶活性.结果 突变型酶活性低,为野生型的3%.结论 L72P突变可引起蛋白质二级结构改变从而导致酶的活性下降.
目的 探討NADH-細胞色素b5還原酶基因突變引起遺傳性高鐵血紅蛋白血癥的分子病理機製,研究突變型(b5R)蛋白結構和功能的關繫.方法 用基因重組技術將野生型和突變型(L72P)b5R cDNA剋隆于pGEX-2T載體,在大腸桿茵BL21中誘導錶達.Western印跡鑒定錶達的蛋白為GST-b5R融閤蛋白.應用穀胱甘肽-Sepharose 4B親和層析,還原型穀胱甘肽洗脫得到純化的GST-b5R和GST-b5R L72P融閤蛋白,比較GST-b5R和GST-b5R L72P酶活性.結果 突變型酶活性低,為野生型的3%.結論 L72P突變可引起蛋白質二級結構改變從而導緻酶的活性下降.
목적 탐토NADH-세포색소b5환원매기인돌변인기유전성고철혈홍단백혈증적분자병리궤제,연구돌변형(b5R)단백결구화공능적관계.방법 용기인중조기술장야생형화돌변형(L72P)b5R cDNA극륭우pGEX-2T재체,재대장간인BL21중유도표체.Western인적감정표체적단백위GST-b5R융합단백.응용곡광감태-Sepharose 4B친화층석,환원형곡광감태세탈득도순화적GST-b5R화GST-b5R L72P융합단백,비교GST-b5R화GST-b5R L72P매활성.결과 돌변형매활성저,위야생형적3%.결론 L72P돌변가인기단백질이급결구개변종이도치매적활성하강.
