解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2008年
5期
546-548
,共3页
周平%房殿春%毛高平%张启杰%曹传平%步晓华%刘为纹
週平%房殿春%毛高平%張啟傑%曹傳平%步曉華%劉為紋
주평%방전춘%모고평%장계걸%조전평%보효화%류위문
端粒,末端转移酶%端粒结合蛋白质类%双杂交系统技术
耑粒,末耑轉移酶%耑粒結閤蛋白質類%雙雜交繫統技術
단립,말단전이매%단립결합단백질류%쌍잡교계통기술
目的 克隆人端粒相关蛋白T-STAR并研究其与端粒酶催化亚单位hTERT在哺乳细胞内的相互作用.方法 构建表达载体pGBKT7-hTERT,以pGBKT7-hTERT为诱饵,采用酵母双杂交技术进行cDNA文库筛选;构建pVP16-T-STAR和pMhTERT重组载体,脂质体法将其与报告质粒共转染入胃腺癌细胞株SGC-7901,以pM-53+pVP16-T、pM3-VP16为阳性对照,以pM53+pVP16-CP为阴性对照;以pM-hTERT+pVP16、pM+pVP16-T-STAR、pM+pVP16为交叉阴性对照.ELISA法检测报告基因CAT的表达.结果 成功构建真核表达载体pGBKT7-hTERT,将获得的阳性克隆测序,并进行同源性比较证实为是已收录的人cDNA序列T-STAR.pGBKT7-hTERT和pVP16-T-STAR共转染之后,报告基因CAT的表达(A值为0.258)显著高于阴性对照(A值为0.002～0.015).结论 T-STAR与hTERT在胃癌细胞内发生了相互作用,T-STAR可能是人端粒相关蛋白新成员,通过hTERT 参与端粒酶活性的调控.
目的 剋隆人耑粒相關蛋白T-STAR併研究其與耑粒酶催化亞單位hTERT在哺乳細胞內的相互作用.方法 構建錶達載體pGBKT7-hTERT,以pGBKT7-hTERT為誘餌,採用酵母雙雜交技術進行cDNA文庫篩選;構建pVP16-T-STAR和pMhTERT重組載體,脂質體法將其與報告質粒共轉染入胃腺癌細胞株SGC-7901,以pM-53+pVP16-T、pM3-VP16為暘性對照,以pM53+pVP16-CP為陰性對照;以pM-hTERT+pVP16、pM+pVP16-T-STAR、pM+pVP16為交扠陰性對照.ELISA法檢測報告基因CAT的錶達.結果 成功構建真覈錶達載體pGBKT7-hTERT,將穫得的暘性剋隆測序,併進行同源性比較證實為是已收錄的人cDNA序列T-STAR.pGBKT7-hTERT和pVP16-T-STAR共轉染之後,報告基因CAT的錶達(A值為0.258)顯著高于陰性對照(A值為0.002～0.015).結論 T-STAR與hTERT在胃癌細胞內髮生瞭相互作用,T-STAR可能是人耑粒相關蛋白新成員,通過hTERT 參與耑粒酶活性的調控.
목적 극륭인단립상관단백T-STAR병연구기여단립매최화아단위hTERT재포유세포내적상호작용.방법 구건표체재체pGBKT7-hTERT,이pGBKT7-hTERT위유이,채용효모쌍잡교기술진행cDNA문고사선;구건pVP16-T-STAR화pMhTERT중조재체,지질체법장기여보고질립공전염입위선암세포주SGC-7901,이pM-53+pVP16-T、pM3-VP16위양성대조,이pM53+pVP16-CP위음성대조;이pM-hTERT+pVP16、pM+pVP16-T-STAR、pM+pVP16위교차음성대조.ELISA법검측보고기인CAT적표체.결과 성공구건진핵표체재체pGBKT7-hTERT,장획득적양성극륭측서,병진행동원성비교증실위시이수록적인cDNA서렬T-STAR.pGBKT7-hTERT화pVP16-T-STAR공전염지후,보고기인CAT적표체(A치위0.258)현저고우음성대조(A치위0.002～0.015).결론 T-STAR여hTERT재위암세포내발생료상호작용,T-STAR가능시인단립상관단백신성원,통과hTERT 삼여단립매활성적조공.
