现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2010年
3期
27-30
,共4页
陆巧荣%方梅%洪志强%余志祥%胡朝友
陸巧榮%方梅%洪誌彊%餘誌祥%鬍朝友
륙교영%방매%홍지강%여지상%호조우
结核分枝杆菌%分子信标荧光定量PCR%单因素法%正交法
結覈分枝桿菌%分子信標熒光定量PCR%單因素法%正交法
결핵분지간균%분자신표형광정량PCR%단인소법%정교법
目的 建立分子信标荧光定量PCR检测结核分枝杆菌的最佳反应体系,探讨影响分子信标荧光定量PCR扩增结果的多个因素.方法 利用单因素法和正交实验法,从MgCl2,引物,分子信标探针,dNTP,Taq DNA聚合酶5种因素对分子信标荧光定量PCR反应体系进行优化,并对这两种方法所得的最优体系进行比较.结果 单因素法得到的最优反应体系(25 μl)为:4 mmol/L MgCl2,上、下游引物各0.3 μmol/L,分子信标探针0.1 μmol/L,200 μmol/L dNTP,2U Taq DNA;正交法得到的最优反应体系(25 μl)为:6 mmol/L MgCl2,上、下游引物各0.2 μmol/L,分子信标探针0.1 μmol/L,100 μmol/L dNTP,3U Taq DNA聚合酶,正交法得到的最优反应体系的荧光定量PCR扩增曲线形状更好,Ct值较小,△Rn较大.结论 采用正交法得到的荧光定量PCR反应体系优于单因素法,进行实时荧光定量PCR反应体系优化时,正交实验设计是一条科学、可靠、高效、快捷的途径.
目的 建立分子信標熒光定量PCR檢測結覈分枝桿菌的最佳反應體繫,探討影響分子信標熒光定量PCR擴增結果的多箇因素.方法 利用單因素法和正交實驗法,從MgCl2,引物,分子信標探針,dNTP,Taq DNA聚閤酶5種因素對分子信標熒光定量PCR反應體繫進行優化,併對這兩種方法所得的最優體繫進行比較.結果 單因素法得到的最優反應體繫(25 μl)為:4 mmol/L MgCl2,上、下遊引物各0.3 μmol/L,分子信標探針0.1 μmol/L,200 μmol/L dNTP,2U Taq DNA;正交法得到的最優反應體繫(25 μl)為:6 mmol/L MgCl2,上、下遊引物各0.2 μmol/L,分子信標探針0.1 μmol/L,100 μmol/L dNTP,3U Taq DNA聚閤酶,正交法得到的最優反應體繫的熒光定量PCR擴增麯線形狀更好,Ct值較小,△Rn較大.結論 採用正交法得到的熒光定量PCR反應體繫優于單因素法,進行實時熒光定量PCR反應體繫優化時,正交實驗設計是一條科學、可靠、高效、快捷的途徑.
목적 건립분자신표형광정량PCR검측결핵분지간균적최가반응체계,탐토영향분자신표형광정량PCR확증결과적다개인소.방법 이용단인소법화정교실험법,종MgCl2,인물,분자신표탐침,dNTP,Taq DNA취합매5충인소대분자신표형광정량PCR반응체계진행우화,병대저량충방법소득적최우체계진행비교.결과 단인소법득도적최우반응체계(25 μl)위:4 mmol/L MgCl2,상、하유인물각0.3 μmol/L,분자신표탐침0.1 μmol/L,200 μmol/L dNTP,2U Taq DNA;정교법득도적최우반응체계(25 μl)위:6 mmol/L MgCl2,상、하유인물각0.2 μmol/L,분자신표탐침0.1 μmol/L,100 μmol/L dNTP,3U Taq DNA취합매,정교법득도적최우반응체계적형광정량PCR확증곡선형상경호,Ct치교소,△Rn교대.결론 채용정교법득도적형광정량PCR반응체계우우단인소법,진행실시형광정량PCR반응체계우화시,정교실험설계시일조과학、가고、고효、쾌첩적도경.
