生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
22-27
,共6页
陈维春%刘振杰%蒋智文%彭琪%袁源%郑慧玲%刘新光
陳維春%劉振傑%蔣智文%彭琪%袁源%鄭慧玲%劉新光
진유춘%류진걸%장지문%팽기%원원%정혜령%류신광
酵母双杂交%A型核纤层蛋白前体%衰老%共定位
酵母雙雜交%A型覈纖層蛋白前體%衰老%共定位
효모쌍잡교%A형핵섬층단백전체%쇠로%공정위
目的:探讨A型核纤层蛋白前体( prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况.方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白.构建了prelaminA识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP - Narf,与红色荧光蛋白- prelamin A融合表达质粒pDsRed - PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况.Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况.结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白.Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高.结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响.
目的:探討A型覈纖層蛋白前體( prelamin A)在細胞內堆積造成細胞早老的機理,篩選瞭prelamin A相互作用蛋白併研究其在早老細胞中的錶達情況.方法:以prelamin A的C末耑區域為誘餌蛋白,採用酵母雙雜交方法從人骨骼肌cDNA文庫中篩選prelamin A相互作用蛋白.構建瞭prelaminA識彆因子(Narf)與綠色熒光蛋白融閤錶達載體pEGFP - Narf,與紅色熒光蛋白- prelamin A融閤錶達質粒pDsRed - PLA共轉染HEK293細胞,激光共聚焦顯微觀察共定位情況.Western blotting檢測Narf在衰老錶型HEK293PLA細胞的錶達情況.結果:篩選得到包括Narf在內的7箇候選相互作用蛋白.Narf與prelamin A能相互作用併共定位于覈纖層,在prelamin A過錶達的HEK293PLA細胞中Narf錶達沒有升高.結論:Narf在細胞內與prelamin A相互作用,且錶達量不受後者影響.
목적:탐토A형핵섬층단백전체( prelamin A)재세포내퇴적조성세포조로적궤리,사선료prelamin A상호작용단백병연구기재조로세포중적표체정황.방법:이prelamin A적C말단구역위유이단백,채용효모쌍잡교방법종인골격기cDNA문고중사선prelamin A상호작용단백.구건료prelaminA식별인자(Narf)여록색형광단백융합표체재체pEGFP - Narf,여홍색형광단백- prelamin A융합표체질립pDsRed - PLA공전염HEK293세포,격광공취초현미관찰공정위정황.Western blotting검측Narf재쇠로표형HEK293PLA세포적표체정황.결과:사선득도포괄Narf재내적7개후선상호작용단백.Narf여prelamin A능상호작용병공정위우핵섬층,재prelamin A과표체적HEK293PLA세포중Narf표체몰유승고.결론:Narf재세포내여prelamin A상호작용,차표체량불수후자영향.
