北京大学学报(自然科学版)
北京大學學報(自然科學版)
북경대학학보(자연과학판)
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS PEKINENSIS
2001年
4期
490-495
,共6页
水蛭素%RGD序列%嵌合抗栓剂
水蛭素%RGD序列%嵌閤抗栓劑
수질소%RGD서렬%감합항전제
通过对水蛭素及一些含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的多肽类血小板聚集抑制剂结构与功能的分析,设计并构建了两个在水蛭素C端融合RGD序列的嵌合分子.嵌合体基因分别重组到表达载体pET-21a(+)中并转化大肠杆菌BL21(DE3).经限制酶消化和DNA序列分析,证明两种重组质粒与设计完全一致.由于RGD-水蛭素嵌合基因上游连接了金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)的信号肽序列,在IPTG诱导下两种嵌合分子都获得了分泌表达,表达产物主要集中在细胞周质空间.通过离子交换层析和凝胶过滤层析分别对两种嵌合体蛋白进行纯化,纯化产物在Tricine-SDS-PAGE中都显示为单一条带.活性分析结果表明两种嵌合体蛋白在保留水蛭素抗凝血酶活力的同时,还呈现抗血小板聚集活性.
通過對水蛭素及一些含有精氨痠-甘氨痠-天鼕氨痠(RGD)序列的多肽類血小闆聚集抑製劑結構與功能的分析,設計併構建瞭兩箇在水蛭素C耑融閤RGD序列的嵌閤分子.嵌閤體基因分彆重組到錶達載體pET-21a(+)中併轉化大腸桿菌BL21(DE3).經限製酶消化和DNA序列分析,證明兩種重組質粒與設計完全一緻.由于RGD-水蛭素嵌閤基因上遊連接瞭金黃色葡萄毬菌蛋白A(SPA)的信號肽序列,在IPTG誘導下兩種嵌閤分子都穫得瞭分泌錶達,錶達產物主要集中在細胞週質空間.通過離子交換層析和凝膠過濾層析分彆對兩種嵌閤體蛋白進行純化,純化產物在Tricine-SDS-PAGE中都顯示為單一條帶.活性分析結果錶明兩種嵌閤體蛋白在保留水蛭素抗凝血酶活力的同時,還呈現抗血小闆聚集活性.
통과대수질소급일사함유정안산-감안산-천동안산(RGD)서렬적다태류혈소판취집억제제결구여공능적분석,설계병구건료량개재수질소C단융합RGD서렬적감합분자.감합체기인분별중조도표체재체pET-21a(+)중병전화대장간균BL21(DE3).경한제매소화화DNA서렬분석,증명량충중조질립여설계완전일치.유우RGD-수질소감합기인상유련접료금황색포도구균단백A(SPA)적신호태서렬,재IPTG유도하량충감합분자도획득료분비표체,표체산물주요집중재세포주질공간.통과리자교환층석화응효과려층석분별대량충감합체단백진행순화,순화산물재Tricine-SDS-PAGE중도현시위단일조대.활성분석결과표명량충감합체단백재보류수질소항응혈매활력적동시,환정현항혈소판취집활성.
