郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2006年
3期
480-483
,共4页
周娟%李永欣%孙战强%李静静%刘光辉%祁元明
週娟%李永訢%孫戰彊%李靜靜%劉光輝%祁元明
주연%리영흔%손전강%리정정%류광휘%기원명
食管肿瘤%热休克蛋白质70%分离与提纯%T淋巴细胞,细胞毒性
食管腫瘤%熱休剋蛋白質70%分離與提純%T淋巴細胞,細胞毒性
식관종류%열휴극단백질70%분리여제순%T림파세포,세포독성
目的:利用抗体亲和层析法从食管癌细胞内提纯热休克蛋白70肽复合物(heat shock protein70 peptidecomplexes,HSP70-PCs),观察其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对食管癌细胞的杀伤作用.方法:常规方法造成EC-109细胞热休克,偶联HSP70抗体的CNBr-Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot检测获得的蛋白;混合淋巴细胞反应检测纯化过程中收集的蛋白粗提液、PBS洗脱蛋白及解吸附剂洗脱蛋白对食管癌细胞的杀伤活性.结果:细胞经热休克作用,裂解后获蛋白粗提液,经亲和层析柱过柱、洗脱后得到的蛋白经电泳鉴定为相对分子质量在70 000左右的单一条带,且经Western blot鉴定可与HSP70单克隆抗体结合,证实为HSP70;MTT法检测解吸附剂洗脱蛋白诱导的CTL对食管癌细胞的杀伤率为(38.10±2.78)%,明显高于蛋白粗提液(22.22±2.54)%和PBS洗脱蛋白(17.46±3.89)%,P均＜0.05.结论:利用抗体亲和层析法,能够简便地从热休克处理过的食管癌细胞株中分离纯化HSP70-PCs,且所获得的HSP70-PCs具有较强的激活CTL杀伤食管癌细胞的生物学活性.
目的:利用抗體親和層析法從食管癌細胞內提純熱休剋蛋白70肽複閤物(heat shock protein70 peptidecomplexes,HSP70-PCs),觀察其誘導的細胞毒性T淋巴細胞(CTL)對食管癌細胞的殺傷作用.方法:常規方法造成EC-109細胞熱休剋,偶聯HSP70抗體的CNBr-Sepharose 4B親和層析柱分離純化蛋白,SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot檢測穫得的蛋白;混閤淋巴細胞反應檢測純化過程中收集的蛋白粗提液、PBS洗脫蛋白及解吸附劑洗脫蛋白對食管癌細胞的殺傷活性.結果:細胞經熱休剋作用,裂解後穫蛋白粗提液,經親和層析柱過柱、洗脫後得到的蛋白經電泳鑒定為相對分子質量在70 000左右的單一條帶,且經Western blot鑒定可與HSP70單剋隆抗體結閤,證實為HSP70;MTT法檢測解吸附劑洗脫蛋白誘導的CTL對食管癌細胞的殺傷率為(38.10±2.78)%,明顯高于蛋白粗提液(22.22±2.54)%和PBS洗脫蛋白(17.46±3.89)%,P均＜0.05.結論:利用抗體親和層析法,能夠簡便地從熱休剋處理過的食管癌細胞株中分離純化HSP70-PCs,且所穫得的HSP70-PCs具有較彊的激活CTL殺傷食管癌細胞的生物學活性.
목적:이용항체친화층석법종식관암세포내제순열휴극단백70태복합물(heat shock protein70 peptidecomplexes,HSP70-PCs),관찰기유도적세포독성T림파세포(CTL)대식관암세포적살상작용.방법:상규방법조성EC-109세포열휴극,우련HSP70항체적CNBr-Sepharose 4B친화층석주분리순화단백,SDS-PAGE응효전영、Western blot검측획득적단백;혼합림파세포반응검측순화과정중수집적단백조제액、PBS세탈단백급해흡부제세탈단백대식관암세포적살상활성.결과:세포경열휴극작용,렬해후획단백조제액,경친화층석주과주、세탈후득도적단백경전영감정위상대분자질량재70 000좌우적단일조대,차경Western blot감정가여HSP70단극륭항체결합,증실위HSP70;MTT법검측해흡부제세탈단백유도적CTL대식관암세포적살상솔위(38.10±2.78)%,명현고우단백조제액(22.22±2.54)%화PBS세탈단백(17.46±3.89)%,P균＜0.05.결론:이용항체친화층석법,능구간편지종열휴극처리과적식관암세포주중분리순화HSP70-PCs,차소획득적HSP70-PCs구유교강적격활CTL살상식관암세포적생물학활성.
