CAJ | 학술논문

背景与目的:吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是一种哺乳动物细胞质中的血红素蛋白,是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径代谢的限速酶.它的表达不仅能抑制病原微生物的生长,还能抑制T细胞的应答,从而介导肿瘤免疫耐受.本研究的目的是表达和纯化His-hIDO融合蛋白,制备兔抗人IDO多克隆抗体,并用此抗体检测IDO在肿瘤细胞中的表达.方法:将编码人IDO全长cDNA克隆入pET30a(+),测序鉴定表达载体pET30a(+)-hIDO,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白His-hIDO;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人IDO多克隆抗体;用Western blot检测该多克隆抗体与重组蛋白His-hIDO的反应性,并用该抗体分析表皮癌细胞A431和肝癌细胞HepG2经IFN-γ诱导前后的IDO表达情况.结果:His-hIDO融合蛋白可与抗His多克隆抗体特异性结合;兔抗人IDO多克隆抗体的效价高,特异性好,能检测肿瘤细胞经IFN-γ诱导后的IDO的表达.结论:兔抗人IDO多克隆抗体能够有效地识别体外表达的IDO蛋白,为研究IDO在肿瘤免疫耐受中的作用提供有力工具.
배경여목적:신타알2,3-쌍가양매(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)시일충포유동물세포질중적혈홍소단백,시최화색안산연견뇨안산도경대사적한속매.타적표체불부능억제병원미생물적생장,환능억제T세포적응답,종이개도종류면역내수.본연구적목적시표체화순화His-hIDO융합단백,제비토항인IDO다극륭항체,병용차항체검측IDO재종류세포중적표체.방법:장편마인IDO전장cDNA극륭입pET30a(+),측서감정표체재체pET30a(+)-hIDO,전화대장간균BL21,IPTG유도표체목적단백His-hIDO;용순화적목적단백면역신서란대백토,획득토항인IDO다극륭항체;용Western blot검측해다극륭항체여중조단백His-hIDO적반응성,병용해항체분석표피암세포A431화간암세포HepG2경IFN-γ유도전후적IDO표체정황.결과:His-hIDO융합단백가여항His다극륭항체특이성결합;토항인IDO다극륭항체적효개고,특이성호,능검측종류세포경IFN-γ유도후적IDO적표체.결론:토항인IDO다극륭항체능구유효지식별체외표체적IDO단백,위연구IDO재종류면역내수중적작용제공유력공구.