CAJ | 학술논문

目的:通过体外细胞培养实验,观察分析壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥、β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)/磷酸钙骨水泥、含钾磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞的影响以及固化后10 d细胞的生物活性变化.方法:首先以兔的骨髓为组织来源,采用密度梯度分离法和贴壁分离法分离培养原代兔骨髓基质细胞(rabbit marrow stromal cell,rMSC),通过流式细胞分析和分选得到成分比较单一的兔骨髓基质细胞,经过体外诱导得到兔成骨细胞,用茜素红染色法验证其成骨功能.将rMSC分别与上述3种骨水泥同化块及其浆料复合培养,空白对照组是直接在24孔板上接种细胞,每组4个样本.在复合培养的第1、4、7、10天,通过酸性磷酸酶(acid phosphatase assay,APA)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定,检测细胞的增殖和分化能力;吖啶橙(acridine or-ange,AO)染色后荧光显微镜观察,对细胞进行计数并分析.环境扫描电子显微镜观察细胞在材料表面的生长、黏附状况.各组结果进行双因素方差分析,用LSD法进行组问比较.结果:3种骨水泥浆料在同化过程中均对rMSC有较大影响,细胞的增殖活性(复合培养第10天APA活性浆料组吸光度平均值分别为0.049,0.050,0.049;固化块组分别为0.898,0.867,0.909;P<0.001)和分化能力(复合培养第10天ALP活性浆料组平均值分别为0.775,0.782.0.798 U/g protein;固化块组分别为49.288,49.631,49.744 U/g protein;P<0.001)均明显低于固化块组,细胞数目也明显减少(复合培养第10天细胞数目每视野平均为3.7,3.7,3.7个;固化块组分别为91.1,89.7,93.7个,P<0.001),且这种影响是不可恢复的;rMSC在3种骨水泥的同化块上能较好地黏附,细胞数目、增殖和分化能力基本不受影响.结论:可注射性磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞有较大的影响,用成骨细胞复合浆料前需对细胞采取保护措施. 目的:通過體外細胞培養實驗,觀察分析殼聚糖微毬/燐痠鈣骨水泥、β-燐痠三鈣(β-tricalcium phosphate,β-TCP)/燐痠鈣骨水泥、含鉀燐痠鈣骨水泥漿料固化過程對成骨細胞的影響以及固化後10 d細胞的生物活性變化.方法:首先以兔的骨髓為組織來源,採用密度梯度分離法和貼壁分離法分離培養原代兔骨髓基質細胞(rabbit marrow stromal cell,rMSC),通過流式細胞分析和分選得到成分比較單一的兔骨髓基質細胞,經過體外誘導得到兔成骨細胞,用茜素紅染色法驗證其成骨功能.將rMSC分彆與上述3種骨水泥同化塊及其漿料複閤培養,空白對照組是直接在24孔闆上接種細胞,每組4箇樣本.在複閤培養的第1、4、7、10天,通過痠性燐痠酶(acid phosphatase assay,APA)和堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,ALP)活性測定,檢測細胞的增殖和分化能力;吖啶橙(acridine or-ange,AO)染色後熒光顯微鏡觀察,對細胞進行計數併分析.環境掃描電子顯微鏡觀察細胞在材料錶麵的生長、黏附狀況.各組結果進行雙因素方差分析,用LSD法進行組問比較.結果:3種骨水泥漿料在同化過程中均對rMSC有較大影響,細胞的增殖活性(複閤培養第10天APA活性漿料組吸光度平均值分彆為0.049,0.050,0.049;固化塊組分彆為0.898,0.867,0.909;P<0.001)和分化能力(複閤培養第10天ALP活性漿料組平均值分彆為0.775,0.782.0.798 U/g protein;固化塊組分彆為49.288,49.631,49.744 U/g protein;P<0.001)均明顯低于固化塊組,細胞數目也明顯減少(複閤培養第10天細胞數目每視野平均為3.7,3.7,3.7箇;固化塊組分彆為91.1,89.7,93.7箇,P<0.001),且這種影響是不可恢複的;rMSC在3種骨水泥的同化塊上能較好地黏附,細胞數目、增殖和分化能力基本不受影響.結論:可註射性燐痠鈣骨水泥漿料固化過程對成骨細胞有較大的影響,用成骨細胞複閤漿料前需對細胞採取保護措施.
목적:통과체외세포배양실험,관찰분석각취당미구/린산개골수니、β-린산삼개(β-tricalcium phosphate,β-TCP)/린산개골수니、함갑린산개골수니장료고화과정대성골세포적영향이급고화후10 d세포적생물활성변화.방법:수선이토적골수위조직래원,채용밀도제도분리법화첩벽분리법분리배양원대토골수기질세포(rabbit marrow stromal cell,rMSC),통과류식세포분석화분선득도성분비교단일적토골수기질세포,경과체외유도득도토성골세포,용천소홍염색법험증기성골공능.장rMSC분별여상술3충골수니동화괴급기장료복합배양,공백대조조시직접재24공판상접충세포,매조4개양본.재복합배양적제1、4、7、10천,통과산성린산매(acid phosphatase assay,APA)화감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)활성측정,검측세포적증식화분화능력;아정등(acridine or-ange,AO)염색후형광현미경관찰,대세포진행계수병분석.배경소묘전자현미경관찰세포재재료표면적생장、점부상황.각조결과진행쌍인소방차분석,용LSD법진행조문비교.결과:3충골수니장료재동화과정중균대rMSC유교대영향,세포적증식활성(복합배양제10천APA활성장료조흡광도평균치분별위0.049,0.050,0.049;고화괴조분별위0.898,0.867,0.909;P<0.001)화분화능력(복합배양제10천ALP활성장료조평균치분별위0.775,0.782.0.798 U/g protein;고화괴조분별위49.288,49.631,49.744 U/g protein;P<0.001)균명현저우고화괴조,세포수목야명현감소(복합배양제10천세포수목매시야평균위3.7,3.7,3.7개;고화괴조분별위91.1,89.7,93.7개,P<0.001),차저충영향시불가회복적;rMSC재3충골수니적동화괴상능교호지점부,세포수목、증식화분화능력기본불수영향.결론:가주사성린산개골수니장료고화과정대성골세포유교대적영향,용성골세포복합장료전수대세포채취보호조시.