畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
5期
59-61
,共3页
缪芬芳%刘明亚%李玉峰%陈闻%许家荣%王先炜%姜平
繆芬芳%劉明亞%李玉峰%陳聞%許傢榮%王先煒%薑平
무분방%류명아%리옥봉%진문%허가영%왕선위%강평
附红细胞体%MsG1表达%多克隆抗体制备
附紅細胞體%MsG1錶達%多剋隆抗體製備
부홍세포체%MsG1표체%다극륭항체제비
本研究将附红细胞体的MSC1蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,合成的基因连接入pBAD/HisB载体后导入大肠杆菌Top10感受态细胞中,进行MSG1诱导表达,确定诱导表达的最佳时间和最佳诱导剂浓度.对表达的蛋白应用His单抗进行了特异性鉴定,对鉴定后的蛋白应用Ni-NTA纯化试剂进行了不同条件下的蛋白纯化.试验结果表明,诱导蛋白的分子量在45 ku左右,加入0.2%的L-阿拉伯糖,诱导2 h后所表达的蛋白量最高.经Western-bolt鉴定,该蛋白可以被His单抗特异性识别,经纯化后可以得到较高纯度的MSG1蛋白.表达的MSG1蛋白经纯化后免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot证明制备的抗体具有高度的特异性.MSG1蛋白的表达和多抗的制备可以为后续研究附红细胞体的吸附机制、致病机理,以及附红细胞体病的治疗等提供理论基础.
本研究將附紅細胞體的MSC1蛋白基因按大腸桿菌密碼子偏嗜性改造後進行全基因人工閤成,閤成的基因連接入pBAD/HisB載體後導入大腸桿菌Top10感受態細胞中,進行MSG1誘導錶達,確定誘導錶達的最佳時間和最佳誘導劑濃度.對錶達的蛋白應用His單抗進行瞭特異性鑒定,對鑒定後的蛋白應用Ni-NTA純化試劑進行瞭不同條件下的蛋白純化.試驗結果錶明,誘導蛋白的分子量在45 ku左右,加入0.2%的L-阿拉伯糖,誘導2 h後所錶達的蛋白量最高.經Western-bolt鑒定,該蛋白可以被His單抗特異性識彆,經純化後可以得到較高純度的MSG1蛋白.錶達的MSG1蛋白經純化後免疫傢兔製備多剋隆抗體,Western blot證明製備的抗體具有高度的特異性.MSG1蛋白的錶達和多抗的製備可以為後續研究附紅細胞體的吸附機製、緻病機理,以及附紅細胞體病的治療等提供理論基礎.
본연구장부홍세포체적MSC1단백기인안대장간균밀마자편기성개조후진행전기인인공합성,합성적기인련접입pBAD/HisB재체후도입대장간균Top10감수태세포중,진행MSG1유도표체,학정유도표체적최가시간화최가유도제농도.대표체적단백응용His단항진행료특이성감정,대감정후적단백응용Ni-NTA순화시제진행료불동조건하적단백순화.시험결과표명,유도단백적분자량재45 ku좌우,가입0.2%적L-아랍백당,유도2 h후소표체적단백량최고.경Western-bolt감정,해단백가이피His단항특이성식별,경순화후가이득도교고순도적MSG1단백.표체적MSG1단백경순화후면역가토제비다극륭항체,Western blot증명제비적항체구유고도적특이성.MSG1단백적표체화다항적제비가이위후속연구부홍세포체적흡부궤제、치병궤리,이급부홍세포체병적치료등제공이론기출.
