东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2011年
2期
298-306
,共9页
郭浪%谭长强%崔毓桂%李王伟
郭浪%譚長彊%崔毓桂%李王偉
곽랑%담장강%최육계%리왕위
骨髓间充质干细胞%白细胞介素4%免疫性感音神经性聋%基因治疗%豚鼠
骨髓間充質榦細胞%白細胞介素4%免疫性感音神經性聾%基因治療%豚鼠
골수간충질간세포%백세포개소4%면역성감음신경성롱%기인치료%돈서
目的:探讨白细胞介素4(IL-4)基因修饰骨髓间充质干细胞(BMSCs)内耳局部植入对免疫性感音神经性聋动物内耳病理损伤和生理功能障碍的调节与治疗作用.方法:采用钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)抗原在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,造成免疫性感音神经性聋动物模型33只.分为IL-4基因修饰BMSCs组(A组)、空载慢病毒感染的BMSCs对照组(B组,即BMSCs空载对照组)和模拟手术对照组(C组),均将BMSCs细胞悬液经鼓阶开窗植入内耳. 提取豚鼠BMSCs,重组IL-4基因的慢病毒载体体外转染BMSCs,成功后鼓阶开窗植入内耳.采用免疫荧光组织化学法和免疫酶组织化学法 分别观察导入内耳的BMSCs 及IL-4基因产物在内耳组织结构中的分布和表达情况.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和听性脑干诱发电位(ABR)测试观察血清抗KLH特异性抗体水平和听觉功能变化,并行内耳石蜡切片光镜观察.结果:局部KLH免疫后与内耳局部BMSCs植入后2周,特异性抗KLH抗体水平差异无统计学意义;A组和B组ABR Ⅲ波阈值不同程度降低,但前者阈值降低更为明显,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学结果显示BMSCs(荧光反应阳性细胞)主要分布在鼓阶、前庭阶,酶反应阳性(IL-4基因产物)部位主要集中于螺旋神经节、骨螺旋板唇部、Corti器、血管纹、耳蜗骨壁以及蜗管中的BMSCs的细胞和其周围.内耳光镜观察结果显示:A组和B组仅在鼓阶内有絮状物,注射部位有少量红细胞和白细胞;C组可见螺旋神经节和蜗轴小血管周围有单个核细胞浸润,部分听损耳还可见螺旋神经节细胞数目减少、不同程度的膜迷路积水、蜗管内有絮状物和漂浮细胞. 结论:重组IL-4基因的慢病毒载体植入内耳后,可在内耳迁移并产生基因产物IL-4.经IL-4基因修饰的BMSCs和空载在体外成功地转染BMSCs.经鼓阶途径BMSCs内耳移植均可明显减轻免疫性感音 神经性聋动物的内耳免疫炎症反应和听觉功能损伤,前者作用更为显著.从而提示BMSCs(包括经IL-4基因修饰的BMSCs)局部应用可对免疫性内耳病的免疫炎症损伤产生一定的调节和治疗作用,并有向病变部位迁移、聚集的倾向.
目的:探討白細胞介素4(IL-4)基因脩飾骨髓間充質榦細胞(BMSCs)內耳跼部植入對免疫性感音神經性聾動物內耳病理損傷和生理功能障礙的調節與治療作用.方法:採用鑰孔嘁血藍蛋白(KLH)抗原在已緻敏的豚鼠圓窗龕跼部免疫,造成免疫性感音神經性聾動物模型33隻.分為IL-4基因脩飾BMSCs組(A組)、空載慢病毒感染的BMSCs對照組(B組,即BMSCs空載對照組)和模擬手術對照組(C組),均將BMSCs細胞懸液經鼓階開窗植入內耳. 提取豚鼠BMSCs,重組IL-4基因的慢病毒載體體外轉染BMSCs,成功後鼓階開窗植入內耳.採用免疫熒光組織化學法和免疫酶組織化學法 分彆觀察導入內耳的BMSCs 及IL-4基因產物在內耳組織結構中的分佈和錶達情況.應用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)和聽性腦榦誘髮電位(ABR)測試觀察血清抗KLH特異性抗體水平和聽覺功能變化,併行內耳石蠟切片光鏡觀察.結果:跼部KLH免疫後與內耳跼部BMSCs植入後2週,特異性抗KLH抗體水平差異無統計學意義;A組和B組ABR Ⅲ波閾值不同程度降低,但前者閾值降低更為明顯,兩組間比較差異有統計學意義(P＜0.05).免疫組織化學結果顯示BMSCs(熒光反應暘性細胞)主要分佈在鼓階、前庭階,酶反應暘性(IL-4基因產物)部位主要集中于螺鏇神經節、骨螺鏇闆脣部、Corti器、血管紋、耳蝸骨壁以及蝸管中的BMSCs的細胞和其週圍.內耳光鏡觀察結果顯示:A組和B組僅在鼓階內有絮狀物,註射部位有少量紅細胞和白細胞;C組可見螺鏇神經節和蝸軸小血管週圍有單箇覈細胞浸潤,部分聽損耳還可見螺鏇神經節細胞數目減少、不同程度的膜迷路積水、蝸管內有絮狀物和漂浮細胞. 結論:重組IL-4基因的慢病毒載體植入內耳後,可在內耳遷移併產生基因產物IL-4.經IL-4基因脩飾的BMSCs和空載在體外成功地轉染BMSCs.經鼓階途徑BMSCs內耳移植均可明顯減輕免疫性感音 神經性聾動物的內耳免疫炎癥反應和聽覺功能損傷,前者作用更為顯著.從而提示BMSCs(包括經IL-4基因脩飾的BMSCs)跼部應用可對免疫性內耳病的免疫炎癥損傷產生一定的調節和治療作用,併有嚮病變部位遷移、聚集的傾嚮.
목적:탐토백세포개소4(IL-4)기인수식골수간충질간세포(BMSCs)내이국부식입대면역성감음신경성롱동물내이병리손상화생리공능장애적조절여치료작용.방법:채용약공잡혈람단백(KLH)항원재이치민적돈서원창감국부면역,조성면역성감음신경성롱동물모형33지.분위IL-4기인수식BMSCs조(A조)、공재만병독감염적BMSCs대조조(B조,즉BMSCs공재대조조)화모의수술대조조(C조),균장BMSCs세포현액경고계개창식입내이. 제취돈서BMSCs,중조IL-4기인적만병독재체체외전염BMSCs,성공후고계개창식입내이.채용면역형광조직화학법화면역매조직화학법 분별관찰도입내이적BMSCs 급IL-4기인산물재내이조직결구중적분포화표체정황.응용매련면역흡부시험(ELISA)화은성뇌간유발전위(ABR)측시관찰혈청항KLH특이성항체수평화은각공능변화,병행내이석사절편광경관찰.결과:국부KLH면역후여내이국부BMSCs식입후2주,특이성항KLH항체수평차이무통계학의의;A조화B조ABR Ⅲ파역치불동정도강저,단전자역치강저경위명현,량조간비교차이유통계학의의(P＜0.05).면역조직화학결과현시BMSCs(형광반응양성세포)주요분포재고계、전정계,매반응양성(IL-4기인산물)부위주요집중우라선신경절、골라선판진부、Corti기、혈관문、이와골벽이급와관중적BMSCs적세포화기주위.내이광경관찰결과현시:A조화B조부재고계내유서상물,주사부위유소량홍세포화백세포;C조가견라선신경절화와축소혈관주위유단개핵세포침윤,부분은손이환가견라선신경절세포수목감소、불동정도적막미로적수、와관내유서상물화표부세포. 결론:중조IL-4기인적만병독재체식입내이후,가재내이천이병산생기인산물IL-4.경IL-4기인수식적BMSCs화공재재체외성공지전염BMSCs.경고계도경BMSCs내이이식균가명현감경면역성감음 신경성롱동물적내이면역염증반응화은각공능손상,전자작용경위현저.종이제시BMSCs(포괄경IL-4기인수식적BMSCs)국부응용가대면역성내이병적면역염증손상산생일정적조절화치료작용,병유향병변부위천이、취집적경향.
