生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2011年
4期
44-48
,共5页
刘刚%杨长得%康康%邢苗%田生礼
劉剛%楊長得%康康%邢苗%田生禮
류강%양장득%강강%형묘%전생례
里氏木霉%根癌农杆菌%分生孢子%潮霉素磷酸转移酶%双元载体
裏氏木黴%根癌農桿菌%分生孢子%潮黴素燐痠轉移酶%雙元載體
리씨목매%근암농간균%분생포자%조매소린산전이매%쌍원재체
目的:采用根癌农杆菌介导的转化方法实现丝状真菌里氏木霉的遗传转化,并优化转化条件.方法:构建含潮霉素抗性基因(hph)的双元载体pCAM-hph后,转化根癌农杆菌LBA4404获得转化菌株.将根癌农杆菌的转化菌株和里氏木霉的分生孢子共培养后在含100μg/mL潮霉素的抗性平板上筛选里氏木霉转化子,并采用PCR扩增和序列测定对转化子中的插入片段进行了分析.结果:使用根癌农杆菌介导的转化方法转化里氏木霉,每106个分生孢子可获得25.8个转化子.最佳的转化条件为:农杆菌初始浓度为OD660约为0.8,孢子数为106个,共培养时间为48h,pH为5.0～5.5,培养温度为28℃.结论:建立了根癌农杆菌介导的里氏木霉转化方法,并获得了最佳的转化条件.
目的:採用根癌農桿菌介導的轉化方法實現絲狀真菌裏氏木黴的遺傳轉化,併優化轉化條件.方法:構建含潮黴素抗性基因(hph)的雙元載體pCAM-hph後,轉化根癌農桿菌LBA4404穫得轉化菌株.將根癌農桿菌的轉化菌株和裏氏木黴的分生孢子共培養後在含100μg/mL潮黴素的抗性平闆上篩選裏氏木黴轉化子,併採用PCR擴增和序列測定對轉化子中的插入片段進行瞭分析.結果:使用根癌農桿菌介導的轉化方法轉化裏氏木黴,每106箇分生孢子可穫得25.8箇轉化子.最佳的轉化條件為:農桿菌初始濃度為OD660約為0.8,孢子數為106箇,共培養時間為48h,pH為5.0～5.5,培養溫度為28℃.結論:建立瞭根癌農桿菌介導的裏氏木黴轉化方法,併穫得瞭最佳的轉化條件.
목적:채용근암농간균개도적전화방법실현사상진균리씨목매적유전전화,병우화전화조건.방법:구건함조매소항성기인(hph)적쌍원재체pCAM-hph후,전화근암농간균LBA4404획득전화균주.장근암농간균적전화균주화리씨목매적분생포자공배양후재함100μg/mL조매소적항성평판상사선리씨목매전화자,병채용PCR확증화서렬측정대전화자중적삽입편단진행료분석.결과:사용근암농간균개도적전화방법전화리씨목매,매106개분생포자가획득25.8개전화자.최가적전화조건위:농간균초시농도위OD660약위0.8,포자수위106개,공배양시간위48h,pH위5.0～5.5,배양온도위28℃.결론:건립료근암농간균개도적리씨목매전화방법,병획득료최가적전화조건.
