中国血吸虫病防治杂志
中國血吸蟲病防治雜誌
중국혈흡충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF SCHISTOSOMIASIS CONTROL
2012年
4期
450-454
,共5页
江文才%金小林%高琪%沈明学%徐祥珍%曹汉钧
江文纔%金小林%高琪%瀋明學%徐祥珍%曹漢鈞
강문재%금소림%고기%침명학%서상진%조한균
华支睾吸虫%半胱氨酸蛋白酶%原核表达系统%真核表达系统%免疫诊断
華支睪吸蟲%半胱氨痠蛋白酶%原覈錶達繫統%真覈錶達繫統%免疫診斷
화지고흡충%반광안산단백매%원핵표체계통%진핵표체계통%면역진단
目的 比较原核和真核2种表达系统重组表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶方法的优劣和目的产物的血清免疫学检测效果.方法 根据已知的华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列分别设计引物扩增目的基因,与相应的表达载体相连分别构建原核表达质粒pET28a-CP和真核表达质粒pPIC9K-CP,双酶切及测序鉴定后,将正确的重组质粒分别转入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中诱导表达、纯化；将获得的纯化蛋白采用ELISA方法检测华支睾吸虫病人血清和正常人血清,比较诊断效果.结果 原核表达系统表达的华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶以包涵体形式存在,表达量为6.84mg/L;真核表达系统表达量达到65.00mg/L,且为可溶性蛋白；两者检测华支睾吸虫病的敏感性分别为95.00％ (57/60)和93.30％ (56/60),特异性分别为91.67％(77/84)和94.10％(79/84),差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 真核表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶较原核表达系统具有更高的应用价值.
目的 比較原覈和真覈2種錶達繫統重組錶達華支睪吸蟲半胱氨痠蛋白酶方法的優劣和目的產物的血清免疫學檢測效果.方法 根據已知的華支睪吸蟲半胱氨痠蛋白酶序列分彆設計引物擴增目的基因,與相應的錶達載體相連分彆構建原覈錶達質粒pET28a-CP和真覈錶達質粒pPIC9K-CP,雙酶切及測序鑒定後,將正確的重組質粒分彆轉入大腸埃希菌(E.coli)BL21(DE3)和畢赤酵母GS115中誘導錶達、純化；將穫得的純化蛋白採用ELISA方法檢測華支睪吸蟲病人血清和正常人血清,比較診斷效果.結果 原覈錶達繫統錶達的華支睪吸蟲半胱氨痠蛋白酶以包涵體形式存在,錶達量為6.84mg/L;真覈錶達繫統錶達量達到65.00mg/L,且為可溶性蛋白；兩者檢測華支睪吸蟲病的敏感性分彆為95.00％ (57/60)和93.30％ (56/60),特異性分彆為91.67％(77/84)和94.10％(79/84),差異均無統計學意義(P均＞0.05).結論 真覈錶達華支睪吸蟲半胱氨痠蛋白酶較原覈錶達繫統具有更高的應用價值.
목적 비교원핵화진핵2충표체계통중조표체화지고흡충반광안산단백매방법적우렬화목적산물적혈청면역학검측효과.방법 근거이지적화지고흡충반광안산단백매서렬분별설계인물확증목적기인,여상응적표체재체상련분별구건원핵표체질립pET28a-CP화진핵표체질립pPIC9K-CP,쌍매절급측서감정후,장정학적중조질립분별전입대장애희균(E.coli)BL21(DE3)화필적효모GS115중유도표체、순화；장획득적순화단백채용ELISA방법검측화지고흡충병인혈청화정상인혈청,비교진단효과.결과 원핵표체계통표체적화지고흡충반광안산단백매이포함체형식존재,표체량위6.84mg/L;진핵표체계통표체량체도65.00mg/L,차위가용성단백；량자검측화지고흡충병적민감성분별위95.00％ (57/60)화93.30％ (56/60),특이성분별위91.67％(77/84)화94.10％(79/84),차이균무통계학의의(P균＞0.05).결론 진핵표체화지고흡충반광안산단백매교원핵표체계통구유경고적응용개치.
