组织工程与重建外科杂志
組織工程與重建外科雜誌
조직공정여중건외과잡지
JOURNAL OF TISSUE ENGINEERING AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2012年
4期
195-200
,共6页
解芳%靳小雷%徐家杰%卢建建%张超%曾海峰%许美邦%田甜%滕利
解芳%靳小雷%徐傢傑%盧建建%張超%曾海峰%許美邦%田甜%滕利
해방%근소뢰%서가걸%로건건%장초%증해봉%허미방%전첨%등리
组织工程骨%骨髓间充质干细胞%异位成骨%CM-DiI
組織工程骨%骨髓間充質榦細胞%異位成骨%CM-DiI
조직공정골%골수간충질간세포%이위성골%CM-DiI
目的 探索组织工程骨体内成骨时,CM-DiI长效示踪骨髓间充质干细胞的可行性,为种子细胞的体内转归研究提供标记方法.方法 分离比格犬BMSCs,成骨诱导至第2代,用荧光染料CM-DiI进行细胞标记.荧光倒置显微镜观察标记后的细胞形态,MTT比色法测定标记前后BMSCs的增殖状况,检测标记前后Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、骨形态发生蛋白(BMP-2)、骨钙素(BGLAP)和骨黏连蛋白(SPARC)的表达.最后,CM-DiI荧光标记后的BMSCs与β-TCP复合共培养后植入比格犬背部皮下,8周后取材,荧光显微镜下观察BMSCs体内转归,HE染色观察异位成骨情况.结果 CM-DiI标记后早期细胞呈现红色荧光,48 h后荧光增强,72 h内荧光强度无明显减弱.BMSCs在CM-DiI标记前后细胞形态基本一致,两组间细胞的增殖率无明显差别;标记后RT-PCR检测Col-Ⅰ、BMP-2、BGLAP、SPARC表达,显示标记后的BMSCs亦可向成骨方向分化.扫描电镜检测到标记后细胞在β-TCP上增殖良好,细胞基质分泌丰富.细胞-支架复合物植入比格犬皮下,8周后荧光显微镜观察到标记细胞仍存在,且HE染色可见支架孔隙中有类骨基质沉积.结论 CM-DiI对BMSCs的生长增殖、成骨分化无明显影响,对体内组织工程骨中BMSCs的示踪时间可长达8周,可用作体内细胞的长效示踪剂.
目的 探索組織工程骨體內成骨時,CM-DiI長效示蹤骨髓間充質榦細胞的可行性,為種子細胞的體內轉歸研究提供標記方法.方法 分離比格犬BMSCs,成骨誘導至第2代,用熒光染料CM-DiI進行細胞標記.熒光倒置顯微鏡觀察標記後的細胞形態,MTT比色法測定標記前後BMSCs的增殖狀況,檢測標記前後Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)、骨形態髮生蛋白(BMP-2)、骨鈣素(BGLAP)和骨黏連蛋白(SPARC)的錶達.最後,CM-DiI熒光標記後的BMSCs與β-TCP複閤共培養後植入比格犬揹部皮下,8週後取材,熒光顯微鏡下觀察BMSCs體內轉歸,HE染色觀察異位成骨情況.結果 CM-DiI標記後早期細胞呈現紅色熒光,48 h後熒光增彊,72 h內熒光彊度無明顯減弱.BMSCs在CM-DiI標記前後細胞形態基本一緻,兩組間細胞的增殖率無明顯差彆;標記後RT-PCR檢測Col-Ⅰ、BMP-2、BGLAP、SPARC錶達,顯示標記後的BMSCs亦可嚮成骨方嚮分化.掃描電鏡檢測到標記後細胞在β-TCP上增殖良好,細胞基質分泌豐富.細胞-支架複閤物植入比格犬皮下,8週後熒光顯微鏡觀察到標記細胞仍存在,且HE染色可見支架孔隙中有類骨基質沉積.結論 CM-DiI對BMSCs的生長增殖、成骨分化無明顯影響,對體內組織工程骨中BMSCs的示蹤時間可長達8週,可用作體內細胞的長效示蹤劑.
목적 탐색조직공정골체내성골시,CM-DiI장효시종골수간충질간세포적가행성,위충자세포적체내전귀연구제공표기방법.방법 분리비격견BMSCs,성골유도지제2대,용형광염료CM-DiI진행세포표기.형광도치현미경관찰표기후적세포형태,MTT비색법측정표기전후BMSCs적증식상황,검측표기전후Ⅰ형효원(Col-Ⅰ)、골형태발생단백(BMP-2)、골개소(BGLAP)화골점련단백(SPARC)적표체.최후,CM-DiI형광표기후적BMSCs여β-TCP복합공배양후식입비격견배부피하,8주후취재,형광현미경하관찰BMSCs체내전귀,HE염색관찰이위성골정황.결과 CM-DiI표기후조기세포정현홍색형광,48 h후형광증강,72 h내형광강도무명현감약.BMSCs재CM-DiI표기전후세포형태기본일치,량조간세포적증식솔무명현차별;표기후RT-PCR검측Col-Ⅰ、BMP-2、BGLAP、SPARC표체,현시표기후적BMSCs역가향성골방향분화.소묘전경검측도표기후세포재β-TCP상증식량호,세포기질분비봉부.세포-지가복합물식입비격견피하,8주후형광현미경관찰도표기세포잉존재,차HE염색가견지가공극중유류골기질침적.결론 CM-DiI대BMSCs적생장증식、성골분화무명현영향,대체내조직공정골중BMSCs적시종시간가장체8주,가용작체내세포적장효시종제.
