CAJ | 학술논문

为了进一步提高植酸酶的发酵效价,降低植酸酶生产成本,对毕赤酵母表达载体pGAPZα-A进行了改造.将表达载体pPIC9的AOX1启动子序列引入pGAPZα-A,使之成为甲醇可诱导型表达载体pAOXZα,插入植酸酶基因appA-m后得到重组载体pAOXZα-appA-m.以染色体上带有一个拷贝的appA-m基因、发酵效价可达到7.5×106IU/mL发酵液的重组酵母菌株74#为受体菌进行转化,在该重组菌株的染色体上的另一位点整合含有植酸酶基因的表达盒,经筛选到高表达植酸酶的重组子.通过PCR进行验证,植酸酶基因被整合到重组酵母的染色体上,且受体菌中原有的植酸酶基因结构未改变.重组菌在5L发酵罐经甲醇诱导120h植酸酶蛋白表达量达到4mg/mL发酵液,酶活性(发酵效价)达到1.2×107IU/mL发酵液以上,较含单拷贝植酸酶基因的受体菌株表达量有较大程度提高.PCR检测及表达量分析证明改良的菌株具有很好的遗传稳定性和表达稳定性.
위료진일보제고식산매적발효효개,강저식산매생산성본,대필적효모표체재체pGAPZα-A진행료개조.장표체재체pPIC9적AOX1계동자서렬인입pGAPZα-A,사지성위갑순가유도형표체재체pAOXZα,삽입식산매기인appA-m후득도중조재체pAOXZα-appA-m.이염색체상대유일개고패적appA-m기인、발효효개가체도7.5×106IU/mL발효액적중조효모균주74#위수체균진행전화,재해중조균주적염색체상적령일위점정합함유식산매기인적표체합,경사선도고표체식산매적중조자.통과PCR진행험증,식산매기인피정합도중조효모적염색체상,차수체균중원유적식산매기인결구미개변.중조균재5L발효관경갑순유도120h식산매단백표체량체도4mg/mL발효액,매활성(발효효개)체도1.2×107IU/mL발효액이상,교함단고패식산매기인적수체균주표체량유교대정도제고.PCR검측급표체량분석증명개량적균주구유흔호적유전은정성화표체은정성.