四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2008年
3期
347-350
,共4页
黄毕%鲍朗%钟琪%商正玲%张会东%王中平
黃畢%鮑朗%鐘琪%商正玲%張會東%王中平
황필%포랑%종기%상정령%장회동%왕중평
钩端螺旋体%外膜蛋白%LipL32%表达%细胞毒性
鉤耑螺鏇體%外膜蛋白%LipL32%錶達%細胞毒性
구단라선체%외막단백%LipL32%표체%세포독성
目的 构建赖型钩端螺旋体(钩体)017株外膜蛋白LipL32基因的重组质粒,并研究其细胞毒性.方法 从钩体017株全基因组中用PCR方法扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达LipL32蛋白,将表达的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,Western Blotting鉴定其免疫原性.将目的蛋白纯化、复性后作用于ECV304细胞,通过检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)、NO释放量研究其细胞毒性.结果 扩增出816 bp的LipL32基因,重组质粒经双酶切、PCR鉴定、测序均表明重组载体构建成功.经IPTG诱导表达的融合蛋白相对分子质量约52×103,主要以包涵体的形式表达,经免疫动物制备得到多克隆抗体,ELISA检测效价达1:32 000,Western Blotting显示在目的蛋白位置处有特异性阳性条带.经过LipL32蛋白作用的ECV304细胞LDH、NO释放量和对照组比较有明显升高.结论 成功构建LipL32基因重组质粒,该质粒能在大肠杆菌中表达.表达的目的蛋白对细胞有一定的毒性效应.
目的 構建賴型鉤耑螺鏇體(鉤體)017株外膜蛋白LipL32基因的重組質粒,併研究其細胞毒性.方法 從鉤體017株全基因組中用PCR方法擴增齣目的基因,雙酶切構建重組質粒,轉化大腸桿菌,誘導錶達LipL32蛋白,將錶達的目的蛋白免疫新西蘭大白兔,製備多剋隆抗體,Western Blotting鑒定其免疫原性.將目的蛋白純化、複性後作用于ECV304細胞,通過檢測細胞的乳痠脫氫酶(LDH)、NO釋放量研究其細胞毒性.結果 擴增齣816 bp的LipL32基因,重組質粒經雙酶切、PCR鑒定、測序均錶明重組載體構建成功.經IPTG誘導錶達的融閤蛋白相對分子質量約52×103,主要以包涵體的形式錶達,經免疫動物製備得到多剋隆抗體,ELISA檢測效價達1:32 000,Western Blotting顯示在目的蛋白位置處有特異性暘性條帶.經過LipL32蛋白作用的ECV304細胞LDH、NO釋放量和對照組比較有明顯升高.結論 成功構建LipL32基因重組質粒,該質粒能在大腸桿菌中錶達.錶達的目的蛋白對細胞有一定的毒性效應.
목적 구건뢰형구단라선체(구체)017주외막단백LipL32기인적중조질립,병연구기세포독성.방법 종구체017주전기인조중용PCR방법확증출목적기인,쌍매절구건중조질립,전화대장간균,유도표체LipL32단백,장표체적목적단백면역신서란대백토,제비다극륭항체,Western Blotting감정기면역원성.장목적단백순화、복성후작용우ECV304세포,통과검측세포적유산탈경매(LDH)、NO석방량연구기세포독성.결과 확증출816 bp적LipL32기인,중조질립경쌍매절、PCR감정、측서균표명중조재체구건성공.경IPTG유도표체적융합단백상대분자질량약52×103,주요이포함체적형식표체,경면역동물제비득도다극륭항체,ELISA검측효개체1:32 000,Western Blotting현시재목적단백위치처유특이성양성조대.경과LipL32단백작용적ECV304세포LDH、NO석방량화대조조비교유명현승고.결론 성공구건LipL32기인중조질립,해질립능재대장간균중표체.표체적목적단백대세포유일정적독성효응.
