中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2008年
2期
157-164
,共8页
陶虹%朱允中%汪惠%赖百塘%张春彦%湛秀萍%王玥%杨学惠%岳文涛%张洪涛
陶虹%硃允中%汪惠%賴百塘%張春彥%湛秀萍%王玥%楊學惠%嶽文濤%張洪濤
도홍%주윤중%왕혜%뢰백당%장춘언%담수평%왕모%양학혜%악문도%장홍도
p53基因%耐药%细胞周期%凋亡
p53基因%耐藥%細胞週期%凋亡
p53기인%내약%세포주기%조망
背景与目的 肺癌细胞的耐药性是影响化疗疗效的重要因素之一,已有的研究表明p53基因异常与肿瘤细胞耐药性的产生密切相关.本研究的目的是探讨不同状态的p53基因对人肺癌细胞系耐药性的影响,为临床选择有针对性的化疗药物提供依据.方法 采用质粒pEGFP,分别构建含正义、反义p53cDNA的真核细胞表达载体,测序法检测外源p53基因.用脂质体介导转染人肺癌细胞系801D,建立含不同p53基因状态的单克隆细胞系,分别为pEGFP-801D、pEGFP-sense p53-801D[含有正义p53,pEGFP-p53(RS)-801D]、pEGFP-antisensep53-801D[含有反义p53,pEGFP-p53(AS)-801D].荧光显微镜观察细胞绿色荧光,PCR法检测外源基因,MTT法检测耐药性,流式细胞术检测细胞周期与凋亡.结果 测序结果显示外源p53基因分别以正向、反向连接于载体,荧光显微镜下转染细胞可见绿色荧光,PCR法检测出外源p53基因和neo基因.pEGFP-p53(AS)-801D细胞系对顺铂(Cisplatin,DDP)的IC50为0.26±0.09μg/mL,显著低于母系(0.55±0.19 μg/mL,P＜0.05)和空载系(0.77±0.13μg/mL,P＜0.05).pEGFP-p53(RS)-801D细胞系对DDP的IC50为0.43±0.25μg/mL,显著低于空载(P=0.000)但高于pEGFP-p53(AS)-801D(P＜0.05).pEGFP-p53(RS)-801D细胞系对紫杉醇(Paclitaxel,TAX)的IC50为2.34±0.43ng/mL,显著低于母系(8.40±1.50 ng/mL,P＜0.05),低于空载系但无显著差异.pEGFP-p53(RS)-801D细胞系对5氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5FU)的IC50为2.08±0.18μg/mL,显著低于母系(4.90±1.12μg/mL,P＜0.05)和空载系(3.41±0.86μg/mL,P＜0.05).DDP能诱导pEGFP-p53(AS)-80lD出现G2期阻滞,TAX、5FU诱导pEGFP-p53(RS)-801D细胞系分别出现G2、S期阻滞,DDP、TAX能诱导细胞凋亡和死亡.结论 肺癌细胞中不同状态的p53基因对化疗药的耐药性有不同影响.p53突变、缺失与DDP耐受相关,p53缺失与TAX、5FU耐受相关,p53突变或缺失与长春瑞宾(Navelbine,NVB)、吉西他宾(Gemcitabine,GEM)耐药均无关.提示针对患者个体的基因情况选用敏感化疗药有助于提高疗效.
揹景與目的 肺癌細胞的耐藥性是影響化療療效的重要因素之一,已有的研究錶明p53基因異常與腫瘤細胞耐藥性的產生密切相關.本研究的目的是探討不同狀態的p53基因對人肺癌細胞繫耐藥性的影響,為臨床選擇有針對性的化療藥物提供依據.方法 採用質粒pEGFP,分彆構建含正義、反義p53cDNA的真覈細胞錶達載體,測序法檢測外源p53基因.用脂質體介導轉染人肺癌細胞繫801D,建立含不同p53基因狀態的單剋隆細胞繫,分彆為pEGFP-801D、pEGFP-sense p53-801D[含有正義p53,pEGFP-p53(RS)-801D]、pEGFP-antisensep53-801D[含有反義p53,pEGFP-p53(AS)-801D].熒光顯微鏡觀察細胞綠色熒光,PCR法檢測外源基因,MTT法檢測耐藥性,流式細胞術檢測細胞週期與凋亡.結果 測序結果顯示外源p53基因分彆以正嚮、反嚮連接于載體,熒光顯微鏡下轉染細胞可見綠色熒光,PCR法檢測齣外源p53基因和neo基因.pEGFP-p53(AS)-801D細胞繫對順鉑(Cisplatin,DDP)的IC50為0.26±0.09μg/mL,顯著低于母繫(0.55±0.19 μg/mL,P＜0.05)和空載繫(0.77±0.13μg/mL,P＜0.05).pEGFP-p53(RS)-801D細胞繫對DDP的IC50為0.43±0.25μg/mL,顯著低于空載(P=0.000)但高于pEGFP-p53(AS)-801D(P＜0.05).pEGFP-p53(RS)-801D細胞繫對紫杉醇(Paclitaxel,TAX)的IC50為2.34±0.43ng/mL,顯著低于母繫(8.40±1.50 ng/mL,P＜0.05),低于空載繫但無顯著差異.pEGFP-p53(RS)-801D細胞繫對5氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5FU)的IC50為2.08±0.18μg/mL,顯著低于母繫(4.90±1.12μg/mL,P＜0.05)和空載繫(3.41±0.86μg/mL,P＜0.05).DDP能誘導pEGFP-p53(AS)-80lD齣現G2期阻滯,TAX、5FU誘導pEGFP-p53(RS)-801D細胞繫分彆齣現G2、S期阻滯,DDP、TAX能誘導細胞凋亡和死亡.結論 肺癌細胞中不同狀態的p53基因對化療藥的耐藥性有不同影響.p53突變、缺失與DDP耐受相關,p53缺失與TAX、5FU耐受相關,p53突變或缺失與長春瑞賓(Navelbine,NVB)、吉西他賓(Gemcitabine,GEM)耐藥均無關.提示針對患者箇體的基因情況選用敏感化療藥有助于提高療效.
배경여목적 폐암세포적내약성시영향화료료효적중요인소지일,이유적연구표명p53기인이상여종류세포내약성적산생밀절상관.본연구적목적시탐토불동상태적p53기인대인폐암세포계내약성적영향,위림상선택유침대성적화료약물제공의거.방법 채용질립pEGFP,분별구건함정의、반의p53cDNA적진핵세포표체재체,측서법검측외원p53기인.용지질체개도전염인폐암세포계801D,건립함불동p53기인상태적단극륭세포계,분별위pEGFP-801D、pEGFP-sense p53-801D[함유정의p53,pEGFP-p53(RS)-801D]、pEGFP-antisensep53-801D[함유반의p53,pEGFP-p53(AS)-801D].형광현미경관찰세포록색형광,PCR법검측외원기인,MTT법검측내약성,류식세포술검측세포주기여조망.결과 측서결과현시외원p53기인분별이정향、반향련접우재체,형광현미경하전염세포가견록색형광,PCR법검측출외원p53기인화neo기인.pEGFP-p53(AS)-801D세포계대순박(Cisplatin,DDP)적IC50위0.26±0.09μg/mL,현저저우모계(0.55±0.19 μg/mL,P＜0.05)화공재계(0.77±0.13μg/mL,P＜0.05).pEGFP-p53(RS)-801D세포계대DDP적IC50위0.43±0.25μg/mL,현저저우공재(P=0.000)단고우pEGFP-p53(AS)-801D(P＜0.05).pEGFP-p53(RS)-801D세포계대자삼순(Paclitaxel,TAX)적IC50위2.34±0.43ng/mL,현저저우모계(8.40±1.50 ng/mL,P＜0.05),저우공재계단무현저차이.pEGFP-p53(RS)-801D세포계대5불뇨밀정(5-Fluorouracil,5FU)적IC50위2.08±0.18μg/mL,현저저우모계(4.90±1.12μg/mL,P＜0.05)화공재계(3.41±0.86μg/mL,P＜0.05).DDP능유도pEGFP-p53(AS)-80lD출현G2기조체,TAX、5FU유도pEGFP-p53(RS)-801D세포계분별출현G2、S기조체,DDP、TAX능유도세포조망화사망.결론 폐암세포중불동상태적p53기인대화료약적내약성유불동영향.p53돌변、결실여DDP내수상관,p53결실여TAX、5FU내수상관,p53돌변혹결실여장춘서빈(Navelbine,NVB)、길서타빈(Gemcitabine,GEM)내약균무관.제시침대환자개체적기인정황선용민감화료약유조우제고료효.
