郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
3期
468-472
,共5页
巩天晓%刘红涛%鲁照明%许培荣%薛乐勋
鞏天曉%劉紅濤%魯照明%許培榮%薛樂勛
공천효%류홍도%로조명%허배영%설악훈
Notch1信号途径%食管鳞状细胞癌细胞%细胞增殖%真核表达载体
Notch1信號途徑%食管鱗狀細胞癌細胞%細胞增殖%真覈錶達載體
Notch1신호도경%식관린상세포암세포%세포증식%진핵표체재체
目的:构建包含Notch1胞内结构域的Notch1-NICD真核表达载体及绿色荧光蛋白载体并转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706及Eca109,并对Notch1-NICD1在食管鳞状细胞癌中的功能进行初步探索.方法:根据Gen-Bank上的Notch1-NICD序列设计扩增引物,由RT-PCR扩增NICD片段,测序鉴定,并通过Blast进行序列比对,然后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)相连,构建Notch1-NICD真核表达载体pNotch1-NICD1,同时将扩增的NICD与pEGFP-C1载体相连构建绿色荧光蛋白表达载体pENotch1-NICD1,并转染EC9706及Eca109,观察Notch1在细胞巾的定位及其途径的激活状态.同时将pNotch1-NICD1真核表达载体转染EC9706及Eca109,用MTT法分别在24 h、48 h、72 h、96 h及120 h观察外源性Notch1片段的导入对EC9706及Eca109细胞增殖的影响.结果:通过RT-PCR获得1个Notch1胞内区片段,并成功构建了包含Notch1胞内区结构域的绿色荧光蛋白载体及真核表达载体.转染pENotch1-NICD1后,Notch1在胞质和胞核内均有表达,表明Notch1信号通路被激活.此外,MTT结果表明转染Notch1-NICD1片段的食管鳞状细胞癌细胞的增殖受到明显抑制(P<0.05).结论:成功构建了Notch1绿色荧光蛋白表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体.外源Notch1片段的引入能够明显抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞状细胞癌的一个潜在的分子靶点.
目的:構建包含Notch1胞內結構域的Notch1-NICD真覈錶達載體及綠色熒光蛋白載體併轉染食管鱗狀細胞癌細胞株EC9706及Eca109,併對Notch1-NICD1在食管鱗狀細胞癌中的功能進行初步探索.方法:根據Gen-Bank上的Notch1-NICD序列設計擴增引物,由RT-PCR擴增NICD片段,測序鑒定,併通過Blast進行序列比對,然後迴收目的片段併與真覈錶達載體pcDNA3.1(+)相連,構建Notch1-NICD真覈錶達載體pNotch1-NICD1,同時將擴增的NICD與pEGFP-C1載體相連構建綠色熒光蛋白錶達載體pENotch1-NICD1,併轉染EC9706及Eca109,觀察Notch1在細胞巾的定位及其途徑的激活狀態.同時將pNotch1-NICD1真覈錶達載體轉染EC9706及Eca109,用MTT法分彆在24 h、48 h、72 h、96 h及120 h觀察外源性Notch1片段的導入對EC9706及Eca109細胞增殖的影響.結果:通過RT-PCR穫得1箇Notch1胞內區片段,併成功構建瞭包含Notch1胞內區結構域的綠色熒光蛋白載體及真覈錶達載體.轉染pENotch1-NICD1後,Notch1在胞質和胞覈內均有錶達,錶明Notch1信號通路被激活.此外,MTT結果錶明轉染Notch1-NICD1片段的食管鱗狀細胞癌細胞的增殖受到明顯抑製(P<0.05).結論:成功構建瞭Notch1綠色熒光蛋白錶達載體及pcDNA3.1(+)真覈錶達載體.外源Notch1片段的引入能夠明顯抑製食管鱗狀細胞癌細胞的增殖,提示Notch1基因有可能成為治療食管鱗狀細胞癌的一箇潛在的分子靶點.
목적:구건포함Notch1포내결구역적Notch1-NICD진핵표체재체급록색형광단백재체병전염식관린상세포암세포주EC9706급Eca109,병대Notch1-NICD1재식관린상세포암중적공능진행초보탐색.방법:근거Gen-Bank상적Notch1-NICD서렬설계확증인물,유RT-PCR확증NICD편단,측서감정,병통과Blast진행서렬비대,연후회수목적편단병여진핵표체재체pcDNA3.1(+)상련,구건Notch1-NICD진핵표체재체pNotch1-NICD1,동시장확증적NICD여pEGFP-C1재체상련구건록색형광단백표체재체pENotch1-NICD1,병전염EC9706급Eca109,관찰Notch1재세포건적정위급기도경적격활상태.동시장pNotch1-NICD1진핵표체재체전염EC9706급Eca109,용MTT법분별재24 h、48 h、72 h、96 h급120 h관찰외원성Notch1편단적도입대EC9706급Eca109세포증식적영향.결과:통과RT-PCR획득1개Notch1포내구편단,병성공구건료포함Notch1포내구결구역적록색형광단백재체급진핵표체재체.전염pENotch1-NICD1후,Notch1재포질화포핵내균유표체,표명Notch1신호통로피격활.차외,MTT결과표명전염Notch1-NICD1편단적식관린상세포암세포적증식수도명현억제(P<0.05).결론:성공구건료Notch1록색형광단백표체재체급pcDNA3.1(+)진핵표체재체.외원Notch1편단적인입능구명현억제식관린상세포암세포적증식,제시Notch1기인유가능성위치료식관린상세포암적일개잠재적분자파점.
