新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
3期
489-494
,共6页
李剑峰%张跃强%樊哲儒%王岩军%王浩%曲延英%范玲
李劍峰%張躍彊%樊哲儒%王巖軍%王浩%麯延英%範玲
리검봉%장약강%번철유%왕암군%왕호%곡연영%범령
小麦叶片%cDNA-AFLP%预扩增%选择性扩增%体系优化
小麥葉片%cDNA-AFLP%預擴增%選擇性擴增%體繫優化
소맥협편%cDNA-AFLP%예확증%선택성확증%체계우화
[目的]建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因.[方法]在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20 μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg2+及TaqDNA聚合酶的用量.[结果]PCR预扩增20 μL反应体系中,引物(40 mM)1.0 μL、dNTP(2.5 mM)1.8 μL、Mg2+(25 mM)2.2 μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5 μL时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20 μL反应体系中,引物(40 mM)0.6 μL、dNTP(2.5 mM)2.0 μL、Mg2+(25 mM)1.6 μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.4 μL时,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcript derived fragments).[结论]试验通过对引物、dNTP、Mg2+ 、TapDNA聚合酶用量等因子进行筛选,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系,得到了更多有效的条带,为利用cDNA-AFLP研究小麦抗旱相关基因的分离及其克隆奠定了良好的基础.
[目的]建立併優化小麥葉片cDNA-AFLP擴增反應體繫,進行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6號相關抗旱基因.[方法]在盆栽小麥苗期水分脅迫下葉片cDNA-AFLP的試驗中,分彆對20 μL預擴增和選擇性擴增反應體繫中的4種反應條件影響因子進行不同梯度優化的研究,包括引物、dNTP、Mg2+及TaqDNA聚閤酶的用量.[結果]PCR預擴增20 μL反應體繫中,引物(40 mM)1.0 μL、dNTP(2.5 mM)1.8 μL、Mg2+(25 mM)2.2 μL、TaqDNA聚閤酶(5U)0.5 μL時預擴增效果較好;PCR選擇性擴增20 μL反應體繫中,引物(40 mM)0.6 μL、dNTP(2.5 mM)2.0 μL、Mg2+(25 mM)1.6 μL、TaqDNA聚閤酶(5U)0.4 μL時,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcript derived fragments).[結論]試驗通過對引物、dNTP、Mg2+ 、TapDNA聚閤酶用量等因子進行篩選,穫得較為理想的預擴增和選擇性擴增體繫,得到瞭更多有效的條帶,為利用cDNA-AFLP研究小麥抗旱相關基因的分離及其剋隆奠定瞭良好的基礎.
[목적]건립병우화소맥협편cDNA-AFLP확증반응체계,진행cDNA-AFLP분석,알굴신춘6호상관항한기인.[방법]재분재소맥묘기수분협박하협편cDNA-AFLP적시험중,분별대20 μL예확증화선택성확증반응체계중적4충반응조건영향인자진행불동제도우화적연구,포괄인물、dNTP、Mg2+급TaqDNA취합매적용량.[결과]PCR예확증20 μL반응체계중,인물(40 mM)1.0 μL、dNTP(2.5 mM)1.8 μL、Mg2+(25 mM)2.2 μL、TaqDNA취합매(5U)0.5 μL시예확증효과교호;PCR선택성확증20 μL반응체계중,인물(40 mM)0.6 μL、dNTP(2.5 mM)2.0 μL、Mg2+(25 mM)1.6 μL、TaqDNA취합매(5U)0.4 μL시,가득도경다청석가변적TDFs(transcript derived fragments).[결론]시험통과대인물、dNTP、Mg2+ 、TapDNA취합매용량등인자진행사선,획득교위이상적예확증화선택성확증체계,득도료경다유효적조대,위이용cDNA-AFLP연구소맥항한상관기인적분리급기극륭전정료량호적기출.
