广州医学院学报
廣州醫學院學報
엄주의학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF GUANGZHOU MEDICAL COLLEGE
2011年
2期
102-105,111
,共5页
黄桂填%肖焕擎%曾山崎%徐波%蔡文松%李书华
黃桂填%肖煥擎%曾山崎%徐波%蔡文鬆%李書華
황계전%초환경%증산기%서파%채문송%리서화
人端粒酶逆转录酶启动%NK4基因%腺病毒
人耑粒酶逆轉錄酶啟動%NK4基因%腺病毒
인단립매역전록매계동%NK4기인%선병독
目的:构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定.方法:根据GenBank中的HTERT启动子(HTERTp)序列设计引物,以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板,PCR扩增HTERTp,并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中,构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG-HTERTp; NK4 cDNA酶切并回收克隆至pSG-HTERTp载体中,构建成pSG-HTERTp/pA-NK4穿梭质粒,脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒；噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒；RT-PCR检测NK4基因的转录；Western Blot检测NK4蛋白的表达.结果:成功构建出成功构建出HTERT 启动子调控的NK4基因重组腺病毒,滴度为4.5×109空斑形成单位(pfu)/mL,且PCR扩增及westernbolt电泳均呈阳性表达.结论:成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒,为进一步研究NK4基因的作用机制打下实验基础.
目的:構建靶嚮結腸癌細胞的人耑粒酶逆轉錄酶HTERT啟動子調控的NK4基因重組腺病毒併對該錶達體繫進行鑒定.方法:根據GenBank中的HTERT啟動子(HTERTp)序列設計引物,以人胚腎293細胞提取基因組DNA為模闆,PCR擴增HTERTp,併將HTERTp序列剋隆入pDC312質粒中,構建成HTERTp調控的腺病毒質粒pSG-HTERTp; NK4 cDNA酶切併迴收剋隆至pSG-HTERTp載體中,構建成pSG-HTERTp/pA-NK4穿梭質粒,脂質體法在293細胞中包裝重組腺病毒；噬斑分析法篩選單剋隆重組腺病毒；RT-PCR檢測NK4基因的轉錄；Western Blot檢測NK4蛋白的錶達.結果:成功構建齣成功構建齣HTERT 啟動子調控的NK4基因重組腺病毒,滴度為4.5×109空斑形成單位(pfu)/mL,且PCR擴增及westernbolt電泳均呈暘性錶達.結論:成功構建齣HTERT啟動子調控的NK4基因重組腺病毒,為進一步研究NK4基因的作用機製打下實驗基礎.
목적:구건파향결장암세포적인단립매역전록매HTERT계동자조공적NK4기인중조선병독병대해표체체계진행감정.방법:근거GenBank중적HTERT계동자(HTERTp)서렬설계인물,이인배신293세포제취기인조DNA위모판,PCR확증HTERTp,병장HTERTp서렬극륭입pDC312질립중,구건성HTERTp조공적선병독질립pSG-HTERTp; NK4 cDNA매절병회수극륭지pSG-HTERTp재체중,구건성pSG-HTERTp/pA-NK4천사질립,지질체법재293세포중포장중조선병독；서반분석법사선단극륭중조선병독；RT-PCR검측NK4기인적전록；Western Blot검측NK4단백적표체.결과:성공구건출성공구건출HTERT 계동자조공적NK4기인중조선병독,적도위4.5×109공반형성단위(pfu)/mL,차PCR확증급westernbolt전영균정양성표체.결론:성공구건출HTERT계동자조공적NK4기인중조선병독,위진일보연구NK4기인적작용궤제타하실험기출.
