CAJ | 학술논문

目的研究香菇C91-3菌丝体发酵液中的粗蛋白LFP91 -3的分离纯化方法,提取具有抗肿瘤活性的蛋白组分,并初步鉴定其药效及特性.方法 LFP91 -3经盐析、透析、Sephadex G - 100凝胶过滤层析分离.用考马斯亮蓝法测定各管收集液中的蛋白浓度,依此绘制洗脱曲线,按曲线对收集液分组；用MTT比色法分别测定各组蛋白收集液对肿瘤细胞的生长抑制作用.对抑瘤率最大的一组各管收集液分别做SDS - PAGE电泳银染,取电泳条带相对较单一的峰尖部数管收集液合并,即为本实验的提取蛋白,以MTT比色法测定其对肿瘤细胞的生长抑制作用.用考马斯亮蓝法和硫酸-苯酚定糖法测定提取蛋白中蛋白和糖的比例.流式细胞仪检测提取蛋白诱导肿瘤细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率；透射电镜观察经该蛋白作用的肿瘤细胞的凋亡形态.结果 LFP91 -3经分离纯化,可得Ⅰ～Ⅳ共4组蛋白峰,且第3组的收集液抑瘤率最高.SDS - PAGE电泳结果显示第3峰顶部23～26管收集液主要含有19 kDa左右的蛋白,其他分子量的蛋白含量极低.测得该蛋白中蛋白和糖比例约为3∶1.MTT法显示提取蛋白在体外能明显抑制鼠肉瘤细胞株S180细胞的生长.流式细胞仪检测结果表明提取蛋白能在体外诱导S180细胞凋亡.透射电镜下,经提取蛋白作用的S180细胞,呈明显的凋亡形态.结论粗蛋白LFP91 -3经盐析、透析、Sephadex G - 100凝胶过滤层析分离共得到4组蛋白,第3组对S180细胞的抑制作用最强,其中第23～26管收集液主要含有分子量为19 kDa左右的蛋白,而且含有糖成分,提示可能为糖蛋白.该提取蛋白对S180细胞的生长具有较强的抑制作用,此作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
목적 연구향고C91-3균사체발효액중적조단백LFP91 -3적분리순화방법,제취구유항종류활성적단백조분,병초보감정기약효급특성.방법 LFP91 -3경염석、투석、Sephadex G - 100응효과려층석분리.용고마사량람법측정각관수집액중적단백농도,의차회제세탈곡선,안곡선대수집액분조；용MTT비색법분별측정각조단백수집액대종류세포적생장억제작용.대억류솔최대적일조각관수집액분별주SDS - PAGE전영은염,취전영조대상대교단일적봉첨부수관수집액합병,즉위본실험적제취단백,이MTT비색법측정기대종류세포적생장억제작용.용고마사량람법화류산-분분정당법측정제취단백중단백화당적비례.류식세포의검측제취단백유도종류세포적조기조망솔화만기조망솔；투사전경관찰경해단백작용적종류세포적조망형태.결과 LFP91 -3경분리순화,가득Ⅰ～Ⅳ공4조단백봉,차제3조적수집액억류솔최고.SDS - PAGE전영결과현시제3봉정부23～26관수집액주요함유19 kDa좌우적단백,기타분자량적단백함량겁저.측득해단백중단백화당비례약위3∶1.MTT법현시제취단백재체외능명현억제서육류세포주S180세포적생장.류식세포의검측결과표명제취단백능재체외유도S180세포조망.투사전경하,경제취단백작용적S180세포,정명현적조망형태.결론 조단백LFP91 -3경염석、투석、Sephadex G - 100응효과려층석분리공득도4조단백,제3조대S180세포적억제작용최강,기중제23～26관수집액주요함유분자량위19 kDa좌우적단백,이차함유당성분,제시가능위당단백.해제취단백대S180세포적생장구유교강적억제작용,차작용여유도종류세포조망유관.