中华器官移植杂志
中華器官移植雜誌
중화기관이식잡지
CHINESE JOURNAL OF ORGAN TRANSPLANTATION
2005年
6期
356-359
,共4页
张志宏%马腾骧%王广有%张月%李胜芝%李光三%刘思金%劳为德
張誌宏%馬騰驤%王廣有%張月%李勝芝%李光三%劉思金%勞為德
장지굉%마등양%왕엄유%장월%리성지%리광삼%류사금%로위덕
移植,异种%移植物排斥%转基因%小鼠
移植,異種%移植物排斥%轉基因%小鼠
이식,이충%이식물배척%전기인%소서
目的为了研究异种移植,建立血管内皮细胞组织特异性表达人衰变加速因子(DAF)的转基因小鼠.方法采用受精卵显微注射技术,将含有人内皮细胞粘附分子-2(ICAM-2)基因启动子、人DAF cDNA(插有人DAF基因第一个内含子)、SV40splice/polyA的外源基因导入小鼠受精卵的原核中;选取注射后仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的输卵管中待分娩.聚合酶链(PCR)技术及Southern印迹杂交法确定外源基因整合阳性转基因小鼠.RT-PCR方法和流式细胞术分别用于外源基因mRNA及蛋白质水平表达的检测.免疫组织化学方法观察人DAF在转基因小鼠心脏、肝脏、肾脏等器官的表达分布.采用Langendorff心脏灌流装置,用200 g/L的稀释人血清灌注转基因小鼠离体心脏,检测其抗超急性排斥反应能力.结果共产仔鼠133只,21只整合有外源基因,整合率16%(21/133).8只实现mRNA及蛋白质水平表达,蛋白质水平表达强度为人DAF基因在人白细胞表达强度的70%至95%,转基因效率6%(8/133).免疫组织化学法显示人DAF在转基因小鼠器官组织切片上有较强表达,且表达限于血管内皮细胞.与普通鼠对比,转基因小鼠离体心脏存活时间明显延长,且60 min 灌注期间内做功仍维持在最大值20%以上.结论成功地建立了血管内皮细胞组织特异性表达人DAF的转基因小鼠.这种小鼠有一定的抗超急性排斥反应能力.
目的為瞭研究異種移植,建立血管內皮細胞組織特異性錶達人衰變加速因子(DAF)的轉基因小鼠.方法採用受精卵顯微註射技術,將含有人內皮細胞粘附分子-2(ICAM-2)基因啟動子、人DAF cDNA(插有人DAF基因第一箇內含子)、SV40splice/polyA的外源基因導入小鼠受精卵的原覈中;選取註射後仍健康的受精卵移植入假孕母鼠的輸卵管中待分娩.聚閤酶鏈(PCR)技術及Southern印跡雜交法確定外源基因整閤暘性轉基因小鼠.RT-PCR方法和流式細胞術分彆用于外源基因mRNA及蛋白質水平錶達的檢測.免疫組織化學方法觀察人DAF在轉基因小鼠心髒、肝髒、腎髒等器官的錶達分佈.採用Langendorff心髒灌流裝置,用200 g/L的稀釋人血清灌註轉基因小鼠離體心髒,檢測其抗超急性排斥反應能力.結果共產仔鼠133隻,21隻整閤有外源基因,整閤率16%(21/133).8隻實現mRNA及蛋白質水平錶達,蛋白質水平錶達彊度為人DAF基因在人白細胞錶達彊度的70%至95%,轉基因效率6%(8/133).免疫組織化學法顯示人DAF在轉基因小鼠器官組織切片上有較彊錶達,且錶達限于血管內皮細胞.與普通鼠對比,轉基因小鼠離體心髒存活時間明顯延長,且60 min 灌註期間內做功仍維持在最大值20%以上.結論成功地建立瞭血管內皮細胞組織特異性錶達人DAF的轉基因小鼠.這種小鼠有一定的抗超急性排斥反應能力.
목적위료연구이충이식,건립혈관내피세포조직특이성표체인쇠변가속인자(DAF)적전기인소서.방법채용수정란현미주사기술,장함유인내피세포점부분자-2(ICAM-2)기인계동자、인DAF cDNA(삽유인DAF기인제일개내함자)、SV40splice/polyA적외원기인도입소서수정란적원핵중;선취주사후잉건강적수정란이식입가잉모서적수란관중대분면.취합매련(PCR)기술급Southern인적잡교법학정외원기인정합양성전기인소서.RT-PCR방법화류식세포술분별용우외원기인mRNA급단백질수평표체적검측.면역조직화학방법관찰인DAF재전기인소서심장、간장、신장등기관적표체분포.채용Langendorff심장관류장치,용200 g/L적희석인혈청관주전기인소서리체심장,검측기항초급성배척반응능력.결과공산자서133지,21지정합유외원기인,정합솔16%(21/133).8지실현mRNA급단백질수평표체,단백질수평표체강도위인DAF기인재인백세포표체강도적70%지95%,전기인효솔6%(8/133).면역조직화학법현시인DAF재전기인소서기관조직절편상유교강표체,차표체한우혈관내피세포.여보통서대비,전기인소서리체심장존활시간명현연장,차60 min 관주기간내주공잉유지재최대치20%이상.결론성공지건립료혈관내피세포조직특이성표체인DAF적전기인소서.저충소서유일정적항초급성배척반응능력.
