海南医学院学报
海南醫學院學報
해남의학원학보
2003年
2期
84-86,95
,共4页
谭光宏%黄风迎%郑少江%罗凌青%钟江华%林岷格
譚光宏%黃風迎%鄭少江%囉凌青%鐘江華%林岷格
담광굉%황풍영%정소강%라릉청%종강화%림민격
胶乳%过敏原Hev b 3%基因表达%重组蛋白类
膠乳%過敏原Hev b 3%基因錶達%重組蛋白類
효유%과민원Hev b 3%기인표체%중조단백류
目的:克隆乳胶主要过敏原Hev b 3基因,构建其原核表达载体并表达和纯化重组蛋白,了解重组的Hev b 3是否具有和相应IgE特异结合的过敏原特性.方法:用RT-PCR方法从新鲜海南橡胶树叶提取的总RNA中扩增出Hev b 3的cDNA,将其克隆于原核表达载体pQE30质粒,转化大肠杆菌XL1-Blue,酶切和测序验证构建的载体,利用Ni-NTA柱层析纯化重组蛋白并用SDS-PAGE和Western Blot验证.结果:酶切和测序结果证实克隆了正确的Hev b 3序列,重组表达并纯化的蛋白具有和特异IgE抗体结合的过敏原特性.结论:成功构建了乳胶主要过敏原的原核表达载体,并纯化了具有过敏原特性的重组蛋白,为过敏原的标准化创造了条件.
目的:剋隆乳膠主要過敏原Hev b 3基因,構建其原覈錶達載體併錶達和純化重組蛋白,瞭解重組的Hev b 3是否具有和相應IgE特異結閤的過敏原特性.方法:用RT-PCR方法從新鮮海南橡膠樹葉提取的總RNA中擴增齣Hev b 3的cDNA,將其剋隆于原覈錶達載體pQE30質粒,轉化大腸桿菌XL1-Blue,酶切和測序驗證構建的載體,利用Ni-NTA柱層析純化重組蛋白併用SDS-PAGE和Western Blot驗證.結果:酶切和測序結果證實剋隆瞭正確的Hev b 3序列,重組錶達併純化的蛋白具有和特異IgE抗體結閤的過敏原特性.結論:成功構建瞭乳膠主要過敏原的原覈錶達載體,併純化瞭具有過敏原特性的重組蛋白,為過敏原的標準化創造瞭條件.
목적:극륭유효주요과민원Hev b 3기인,구건기원핵표체재체병표체화순화중조단백,료해중조적Hev b 3시부구유화상응IgE특이결합적과민원특성.방법:용RT-PCR방법종신선해남상효수협제취적총RNA중확증출Hev b 3적cDNA,장기극륭우원핵표체재체pQE30질립,전화대장간균XL1-Blue,매절화측서험증구건적재체,이용Ni-NTA주층석순화중조단백병용SDS-PAGE화Western Blot험증.결과:매절화측서결과증실극륭료정학적Hev b 3서렬,중조표체병순화적단백구유화특이IgE항체결합적과민원특성.결론:성공구건료유효주요과민원적원핵표체재체,병순화료구유과민원특성적중조단백,위과민원적표준화창조료조건.
