CAJ | 학술논문

目的采用基因工程技术获得具有良好免疫反应性的重组细胞空泡毒素的毒性亚单位蛋白.方法利用PCR技术从Hp基因组中扩增VacA基因毒性片段,插入原核表达载体pQE30上,测序后,转化表达宿主菌DH5α,SDS-PAGE分析表达情况,Western blot检测其免疫反应性.Ni-NTA2+树脂纯化后,用重组蛋白免疫兔,Helico Blot试剂盒检测兔血清VacA抗体以鉴定其免疫原性.结果测序表明目的序列完整,与Genbank中的多株中国菌株相比有高度的同源性.SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为27 000,表达量为30%以上.该蛋白可被Hp全菌抗血清所识别,纯化后可得到纯度为93%以上蛋白质,并证实有良好的免疫原性.结论 Hp VacA基因毒性片段表达成功,获得高纯度重组蛋白并具有良好的免疫反应性与免疫原性,为研制疫苗和制备诊断VacA(+)株感染试剂盒提供了可靠材料.
목적채용기인공정기술획득구유량호면역반응성적중조세포공포독소적독성아단위단백.방법이용PCR기술종Hp기인조중확증VacA기인독성편단,삽입원핵표체재체pQE30상,측서후,전화표체숙주균DH5α,SDS-PAGE분석표체정황,Western blot검측기면역반응성.Ni-NTA2+수지순화후,용중조단백면역토,Helico Blot시제합검측토혈청VacA항체이감정기면역원성.결과측서표명목적서렬완정,여Genbank중적다주중국균주상비유고도적동원성.SDS-PAGE현시표체산물상대분자량위27 000,표체량위30%이상.해단백가피Hp전균항혈청소식별,순화후가득도순도위93%이상단백질,병증실유량호적면역원성.결론 Hp VacA기인독성편단표체성공,획득고순도중조단백병구유량호적면역반응성여면역원성,위연제역묘화제비진단VacA(+)주감염시제합제공료가고재료.