重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2007年
5期
455-458,502
,共5页
张琴%赵晓东%毛华伟%杨锡强
張琴%趙曉東%毛華偉%楊錫彊
장금%조효동%모화위%양석강
人类偏肺病毒%融合蛋白%真核表达%杆状病毒
人類偏肺病毒%融閤蛋白%真覈錶達%桿狀病毒
인류편폐병독%융합단백%진핵표체%간상병독
目的:构建人类偏肺病毒融合蛋白(F)基因的真核表达质粒,并在昆虫细胞sf-9中表达.方法:采用RT-PCR法扩增人类偏肺病毒A亚型CAN97-83 F基因的全长序列,将其插入供体质粒pFastBacHT载体多克隆位点区,经酶切鉴定后转化大肠杆菌DH10bac.供体质粒与受体杆粒(Bacmid)发生位点特异性转座获得重组的杆粒.采用脂质体将重组杆粒转染进昆虫细胞sf-9,包装获得感染性杆状病毒.用此病毒感染sf-9细胞并表达蛋白,经6×His树脂纯化后用免疫印迹法验证表达蛋白.结果:PCR及序列分析证实所获得的重组杆粒包含hMPV全长F基因序列,被重组杆状病毒感染的昆虫细胞sf-9显示典型细胞病变.采用抗6×His单克隆抗体为一抗,免疫印迹法检测到分子量约70ku的较单一的蛋白条带,证实F蛋白表达成功.结论:杆状病毒是一高通量、目标蛋白抗原性保存完好的表达系统.采用这一系统成功表达的hMPV F蛋白,将为我国hMPV血清流行病学和免疫发病机理研究奠定基础.
目的:構建人類偏肺病毒融閤蛋白(F)基因的真覈錶達質粒,併在昆蟲細胞sf-9中錶達.方法:採用RT-PCR法擴增人類偏肺病毒A亞型CAN97-83 F基因的全長序列,將其插入供體質粒pFastBacHT載體多剋隆位點區,經酶切鑒定後轉化大腸桿菌DH10bac.供體質粒與受體桿粒(Bacmid)髮生位點特異性轉座穫得重組的桿粒.採用脂質體將重組桿粒轉染進昆蟲細胞sf-9,包裝穫得感染性桿狀病毒.用此病毒感染sf-9細胞併錶達蛋白,經6×His樹脂純化後用免疫印跡法驗證錶達蛋白.結果:PCR及序列分析證實所穫得的重組桿粒包含hMPV全長F基因序列,被重組桿狀病毒感染的昆蟲細胞sf-9顯示典型細胞病變.採用抗6×His單剋隆抗體為一抗,免疫印跡法檢測到分子量約70ku的較單一的蛋白條帶,證實F蛋白錶達成功.結論:桿狀病毒是一高通量、目標蛋白抗原性保存完好的錶達繫統.採用這一繫統成功錶達的hMPV F蛋白,將為我國hMPV血清流行病學和免疫髮病機理研究奠定基礎.
목적:구건인류편폐병독융합단백(F)기인적진핵표체질립,병재곤충세포sf-9중표체.방법:채용RT-PCR법확증인류편폐병독A아형CAN97-83 F기인적전장서렬,장기삽입공체질립pFastBacHT재체다극륭위점구,경매절감정후전화대장간균DH10bac.공체질립여수체간립(Bacmid)발생위점특이성전좌획득중조적간립.채용지질체장중조간립전염진곤충세포sf-9,포장획득감염성간상병독.용차병독감염sf-9세포병표체단백,경6×His수지순화후용면역인적법험증표체단백.결과:PCR급서렬분석증실소획득적중조간립포함hMPV전장F기인서렬,피중조간상병독감염적곤충세포sf-9현시전형세포병변.채용항6×His단극륭항체위일항,면역인적법검측도분자량약70ku적교단일적단백조대,증실F단백표체성공.결론:간상병독시일고통량、목표단백항원성보존완호적표체계통.채용저일계통성공표체적hMPV F단백,장위아국hMPV혈청류행병학화면역발병궤리연구전정기출.
