CAJ | 학술논문

目的:间充质干细胞的诱导分化的研究多见于骨髓、脐血等组织,而在鹿茸组织中分离的间充质干细胞是否能诱导为软骨细胞目前尚不清楚.实验拟建立梅花鹿鹿茸生长中心间充质干细胞体外培养方法,观察转化生长因子β1体外诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞的可行性.方法:实验于2006-03/2007-06在吉林大学畜牧兽医学院基础兽医研究室完成.①实验材料:4岁龄健康雄性梅花鹿由中国农科院左家特产研究所提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:于生长早期锯取梅花鹿鹿茸,在解剖显微镜下定位和切取间质层(突起部),即为鹿茸间充质干细胞所在的组织层.Ⅰ型胶原酶消化法原代分离培养鹿茸生长中心间充质干细胞,锥虫蓝染色显示细胞活性达90%以上,将活性确定后的细胞液氮冻存.取第3代细胞,用含10%胎牛血清以及10 μg/L转化生长因子β1的条件培养基诱导培养.③实验评估:培养12 d 后于倒置显微镜下观察细胞形态,采用细胞化学及免疫细胞化学鉴定细胞.结果:①鹿茸生长中心间充质干细胞的分离与培养:Ⅰ型胶原酶消化法培养可以获得均一的间充质干细胞,贴壁的间充质干细胞形态均匀,呈长梭形,克隆样生长,增殖迅速.②转化生长因子β1体外定向诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞:转化生长因子β1诱导分化的鹿茸间充质细胞生长迅速,诱导后细胞形态明显改变,呈典型的软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原表达阳性.结论:采用酶消化法可以从鹿茸生长中心间充质层中分离出间充质干细胞,在体外转化生长因子β1具有促进鹿茸生长中心间充质干细胞分化为软骨细胞的能力.
목적:간충질간세포적유도분화적연구다견우골수、제혈등조직,이재록용조직중분리적간충질간세포시부능유도위연골세포목전상불청초.실험의건립매화록록용생장중심간충질간세포체외배양방법,관찰전화생장인자β1체외유도록용간충질세포분화위연골세포적가행성.방법:실험우2006-03/2007-06재길림대학축목수의학원기출수의연구실완성.①실험재료:4세령건강웅성매화록유중국농과원좌가특산연구소제공,실험과정중대동물처치부합동물윤리학표준.②실험방법:우생장조기거취매화록록용,재해부현미경하정위화절취간질층(돌기부),즉위록용간충질간세포소재적조직층.Ⅰ형효원매소화법원대분리배양록용생장중심간충질간세포,추충람염색현시세포활성체90%이상,장활성학정후적세포액담동존.취제3대세포,용함10%태우혈청이급10 μg/L전화생장인자β1적조건배양기유도배양.③실험평고:배양12 d 후우도치현미경하관찰세포형태,채용세포화학급면역세포화학감정세포.결과:①록용생장중심간충질간세포적분리여배양:Ⅰ형효원매소화법배양가이획득균일적간충질간세포,첩벽적간충질간세포형태균균,정장사형,극륭양생장,증식신속.②전화생장인자β1체외정향유도록용간충질세포분화위연골세포:전화생장인자β1유도분화적록용간충질세포생장신속,유도후세포형태명현개변,정전형적연골세포형태,갑분알람염색양성,Ⅱ형효원표체양성.결론:채용매소화법가이종록용생장중심간충질층중분리출간충질간세포,재체외전화생장인자β1구유촉진록용생장중심간충질간세포분화위연골세포적능력.