郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2008年
3期
535-538
,共4页
靳静%赵国新%杨松华%冯龙%马云云%卫艳萍%赵国强
靳靜%趙國新%楊鬆華%馮龍%馬雲雲%衛豔萍%趙國彊
근정%조국신%양송화%풍룡%마운운%위염평%조국강
CCR5%RNA干扰%人免疫缺陷病毒1型%辅助受体
CCR5%RNA榦擾%人免疫缺陷病毒1型%輔助受體
CCR5%RNA간우%인면역결함병독1형%보조수체
目的:抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的辅助受体CCR5表达, 阻止HIV-1进入靶细胞.方法:设计CCR5靶向的发夹状siRNA,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹pRNAT-U6.2-siCCR5后转染U937细胞,采用RT-PCR和流式细胞术分别检测CCR5基因mRNA和蛋白表达的变化.结果:重组子pRNAT-U6.2-siCCR5,经过测序鉴定与设计一致.RT-PCR检测显示, 转染pRNAT-U6.2-siCCR5细胞的CCR5基因表达水平显著降低于未转染对照组和转染空载体细胞(P<0.05).未转染对照组U937细胞表面CCR5的表达率为(83.10±6.52)%, 转染空载体组为(81.44±4.97)%,转染pRNAT-U6.2-siCCR5组为(1.94±0.06)%,3组间差异有统计学意义(P<0.05).结论:成功构建出沉默细胞CCR5基因表达的siRNA载体.
目的:抑製細胞錶麵人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的輔助受體CCR5錶達, 阻止HIV-1進入靶細胞.方法:設計CCR5靶嚮的髮夾狀siRNA,閤成2條互補的寡覈苷痠鏈,退火後重組入pRNAT-U6.2載體,轉化擴增後進行序列測定.用脂質體包裹pRNAT-U6.2-siCCR5後轉染U937細胞,採用RT-PCR和流式細胞術分彆檢測CCR5基因mRNA和蛋白錶達的變化.結果:重組子pRNAT-U6.2-siCCR5,經過測序鑒定與設計一緻.RT-PCR檢測顯示, 轉染pRNAT-U6.2-siCCR5細胞的CCR5基因錶達水平顯著降低于未轉染對照組和轉染空載體細胞(P<0.05).未轉染對照組U937細胞錶麵CCR5的錶達率為(83.10±6.52)%, 轉染空載體組為(81.44±4.97)%,轉染pRNAT-U6.2-siCCR5組為(1.94±0.06)%,3組間差異有統計學意義(P<0.05).結論:成功構建齣沉默細胞CCR5基因錶達的siRNA載體.
목적:억제세포표면인면역결함병독1형(HIV-1)적보조수체CCR5표체, 조지HIV-1진입파세포.방법:설계CCR5파향적발협상siRNA,합성2조호보적과핵감산련,퇴화후중조입pRNAT-U6.2재체,전화확증후진행서렬측정.용지질체포과pRNAT-U6.2-siCCR5후전염U937세포,채용RT-PCR화류식세포술분별검측CCR5기인mRNA화단백표체적변화.결과:중조자pRNAT-U6.2-siCCR5,경과측서감정여설계일치.RT-PCR검측현시, 전염pRNAT-U6.2-siCCR5세포적CCR5기인표체수평현저강저우미전염대조조화전염공재체세포(P<0.05).미전염대조조U937세포표면CCR5적표체솔위(83.10±6.52)%, 전염공재체조위(81.44±4.97)%,전염pRNAT-U6.2-siCCR5조위(1.94±0.06)%,3조간차이유통계학의의(P<0.05).결론:성공구건출침묵세포CCR5기인표체적siRNA재체.
