山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2010年
10期
10-11
,共2页
谢斌辉%王小农%刘凤恩%钟宝元%徐道峰%何晓%彭宝岗
謝斌輝%王小農%劉鳳恩%鐘寶元%徐道峰%何曉%彭寶崗
사빈휘%왕소농%류봉은%종보원%서도봉%하효%팽보강
肝细胞%乙型肝炎病毒X基因%真核表达载体%转基因细胞模型
肝細胞%乙型肝炎病毒X基因%真覈錶達載體%轉基因細胞模型
간세포%을형간염병독X기인%진핵표체재체%전기인세포모형
目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒X基因(HBVx)的正常人肝细胞株.方法 用PCR法扩增含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列,构建HBVx基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBVx,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并对其进行双酶切和测序鉴定;用脂质体转染法将HBVx基因导入Chang细胞系,G418筛选,RT-PCR和Western blot鉴定.结果 X基因亚克隆入pcDNA3.1(+),含有完整的X基因片段,转染后Chang细胞有HBVx mRNA表达,Chang/HBVx有HBVx蛋白的表达.结论 构建了稳定表达HBVx基因的肝细胞株Chang/HBVx.
目的 構建穩定錶達乙型肝炎病毒X基因(HBVx)的正常人肝細胞株.方法 用PCR法擴增含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位點的X基因序列,構建HBVx基因真覈錶達載體pcDNA3.1(+)-HBVx,轉化大腸桿菌DH5α,篩選暘性剋隆併對其進行雙酶切和測序鑒定;用脂質體轉染法將HBVx基因導入Chang細胞繫,G418篩選,RT-PCR和Western blot鑒定.結果 X基因亞剋隆入pcDNA3.1(+),含有完整的X基因片段,轉染後Chang細胞有HBVx mRNA錶達,Chang/HBVx有HBVx蛋白的錶達.結論 構建瞭穩定錶達HBVx基因的肝細胞株Chang/HBVx.
목적 구건은정표체을형간염병독X기인(HBVx)적정상인간세포주.방법 용PCR법확증함EcoRⅠ화HindⅢ매절위점적X기인서렬,구건HBVx기인진핵표체재체pcDNA3.1(+)-HBVx,전화대장간균DH5α,사선양성극륭병대기진행쌍매절화측서감정;용지질체전염법장HBVx기인도입Chang세포계,G418사선,RT-PCR화Western blot감정.결과 X기인아극륭입pcDNA3.1(+),함유완정적X기인편단,전염후Chang세포유HBVx mRNA표체,Chang/HBVx유HBVx단백적표체.결론 구건료은정표체HBVx기인적간세포주Chang/HBVx.
