医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2010年
1期
43-47
,共5页
腺病毒载体%米非司酮%基因调控%绿色荧光蛋白
腺病毒載體%米非司酮%基因調控%綠色熒光蛋白
선병독재체%미비사동%기인조공%록색형광단백
目的 在基因表达和基因治疗研究中,目的 基因过度表达或不适当的表达将影响实验结果,实现对目的 基因表达时间和表达水平的精确调控是关键问题.文中旨在构建带绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecence protein,EGFP)并可经米非司酮诱导表达的重组腺病毒载体,以期用于基因治疗研究.方法 酶切含有EGFP基因和启动子以及含有米非司酮调控系统的质粒pRS-17 ,亚克隆到穿梭质粒PDC313上,筛选阳性克隆,测序鉴定正确,将其与Admax腺病毒包装系统的辅助质粒共转染293细胞后,构建出可调控的重组腺病毒载体,利用报告基因引物对病毒进行鉴定,扩增后用氯化铯密度梯度离心纯化病毒,用最终稀释法测定其滴度,并在SW620细胞中检测其基因调控效果.结果 成功地构建了携带有米非司酮调控系统的可调控腺病毒载体Ad-RUEGFP,病毒滴度达到6.6×1010pfu/ml.当给予诱导剂米非司酮后,腺病毒载体可以诱导表达EGFP,两者在一定范围内呈正比,而没有米非司酮时,几乎无报告基因的表达.结论 腺病毒 Ad-RUEGFP能调控外源基因的表达,为下一步体内基因治疗实验奠定了实验基础.
目的 在基因錶達和基因治療研究中,目的 基因過度錶達或不適噹的錶達將影響實驗結果,實現對目的 基因錶達時間和錶達水平的精確調控是關鍵問題.文中旨在構建帶綠色熒光蛋白(enhanced green fluorecence protein,EGFP)併可經米非司酮誘導錶達的重組腺病毒載體,以期用于基因治療研究.方法 酶切含有EGFP基因和啟動子以及含有米非司酮調控繫統的質粒pRS-17 ,亞剋隆到穿梭質粒PDC313上,篩選暘性剋隆,測序鑒定正確,將其與Admax腺病毒包裝繫統的輔助質粒共轉染293細胞後,構建齣可調控的重組腺病毒載體,利用報告基因引物對病毒進行鑒定,擴增後用氯化銫密度梯度離心純化病毒,用最終稀釋法測定其滴度,併在SW620細胞中檢測其基因調控效果.結果 成功地構建瞭攜帶有米非司酮調控繫統的可調控腺病毒載體Ad-RUEGFP,病毒滴度達到6.6×1010pfu/ml.噹給予誘導劑米非司酮後,腺病毒載體可以誘導錶達EGFP,兩者在一定範圍內呈正比,而沒有米非司酮時,幾乎無報告基因的錶達.結論 腺病毒 Ad-RUEGFP能調控外源基因的錶達,為下一步體內基因治療實驗奠定瞭實驗基礎.
목적 재기인표체화기인치료연구중,목적 기인과도표체혹불괄당적표체장영향실험결과,실현대목적 기인표체시간화표체수평적정학조공시관건문제.문중지재구건대록색형광단백(enhanced green fluorecence protein,EGFP)병가경미비사동유도표체적중조선병독재체,이기용우기인치료연구.방법 매절함유EGFP기인화계동자이급함유미비사동조공계통적질립pRS-17 ,아극륭도천사질립PDC313상,사선양성극륭,측서감정정학,장기여Admax선병독포장계통적보조질립공전염293세포후,구건출가조공적중조선병독재체,이용보고기인인물대병독진행감정,확증후용록화색밀도제도리심순화병독,용최종희석법측정기적도,병재SW620세포중검측기기인조공효과.결과 성공지구건료휴대유미비사동조공계통적가조공선병독재체Ad-RUEGFP,병독적도체도6.6×1010pfu/ml.당급여유도제미비사동후,선병독재체가이유도표체EGFP,량자재일정범위내정정비,이몰유미비사동시,궤호무보고기인적표체.결론 선병독 Ad-RUEGFP능조공외원기인적표체,위하일보체내기인치료실험전정료실험기출.
