现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2010年
2期
15-18
,共4页
贺宽耀%陈惠%崔书建%韩泽广%刘锋
賀寬耀%陳惠%崔書建%韓澤廣%劉鋒
하관요%진혜%최서건%한택엄%류봉
日本血吸虫%原肌球蛋白%原核表达%免疫原性
日本血吸蟲%原肌毬蛋白%原覈錶達%免疫原性
일본혈흡충%원기구단백%원핵표체%면역원성
目的 将日本血吸虫原肌球蛋白基因(tropomyosin)克隆到原核表达载体pET-28a(+)裁体上,在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中表达其产物,并对其进行免疫原性分析.方法 从日本血吸虫的Expressed Sequence Tag(EST)文库中筛选出包含tropomyosin全长基因的EST,然后用高保真酶PCR扩增,构建到pET-280(+)裁体上,最终在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IFTG)诱导表达.表达的his-tropomyosin融合蛋白用镍螯舍树脂蛋白纯化柱(Ni-NTA resin)亲和层析纯化,得到纯度较高的tropomyosin后,通过Western Blotting技术,用感染日本血吸虫的兔血清作为天然抗体来研究tropomyosi的免疫原性.结果 pET-28a(+)-tropomyosin重组质粒在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中成功表达,使用SDS-PAGE分析得到实际Mr约为40 000的his-tropomyosin融合蛋白,Ni-NTA resin的纯化效果很明显,获得的相对纯的目的 蛋白经过Western BIotting方法 检潮显示:tropomyosin融合蛋白能够与感染日本血吸虫6 w的兔血清有较强的免疫反应.结论 Tropomyosin能够在BL-21(DE3)型大肠埃希菌中高效表达,且抗原免疫原性强,日本血吸虫感染的兔血清能够识别体外表达的tropomyosin,具有与天然的tropomyosin相同的免疫原性.
目的 將日本血吸蟲原肌毬蛋白基因(tropomyosin)剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)裁體上,在BL-21(DE3)型大腸埃希菌中錶達其產物,併對其進行免疫原性分析.方法 從日本血吸蟲的Expressed Sequence Tag(EST)文庫中篩選齣包含tropomyosin全長基因的EST,然後用高保真酶PCR擴增,構建到pET-280(+)裁體上,最終在BL-21(DE3)型大腸埃希菌中用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IFTG)誘導錶達.錶達的his-tropomyosin融閤蛋白用鎳螯捨樹脂蛋白純化柱(Ni-NTA resin)親和層析純化,得到純度較高的tropomyosin後,通過Western Blotting技術,用感染日本血吸蟲的兔血清作為天然抗體來研究tropomyosi的免疫原性.結果 pET-28a(+)-tropomyosin重組質粒在BL-21(DE3)型大腸埃希菌中成功錶達,使用SDS-PAGE分析得到實際Mr約為40 000的his-tropomyosin融閤蛋白,Ni-NTA resin的純化效果很明顯,穫得的相對純的目的 蛋白經過Western BIotting方法 檢潮顯示:tropomyosin融閤蛋白能夠與感染日本血吸蟲6 w的兔血清有較彊的免疫反應.結論 Tropomyosin能夠在BL-21(DE3)型大腸埃希菌中高效錶達,且抗原免疫原性彊,日本血吸蟲感染的兔血清能夠識彆體外錶達的tropomyosin,具有與天然的tropomyosin相同的免疫原性.
목적 장일본혈흡충원기구단백기인(tropomyosin)극륭도원핵표체재체pET-28a(+)재체상,재BL-21(DE3)형대장애희균중표체기산물,병대기진행면역원성분석.방법 종일본혈흡충적Expressed Sequence Tag(EST)문고중사선출포함tropomyosin전장기인적EST,연후용고보진매PCR확증,구건도pET-280(+)재체상,최종재BL-21(DE3)형대장애희균중용이병기-β-D-류대반유당감(IFTG)유도표체.표체적his-tropomyosin융합단백용얼오사수지단백순화주(Ni-NTA resin)친화층석순화,득도순도교고적tropomyosin후,통과Western Blotting기술,용감염일본혈흡충적토혈청작위천연항체래연구tropomyosi적면역원성.결과 pET-28a(+)-tropomyosin중조질립재BL-21(DE3)형대장애희균중성공표체,사용SDS-PAGE분석득도실제Mr약위40 000적his-tropomyosin융합단백,Ni-NTA resin적순화효과흔명현,획득적상대순적목적 단백경과Western BIotting방법 검조현시:tropomyosin융합단백능구여감염일본혈흡충6 w적토혈청유교강적면역반응.결론 Tropomyosin능구재BL-21(DE3)형대장애희균중고효표체,차항원면역원성강,일본혈흡충감염적토혈청능구식별체외표체적tropomyosin,구유여천연적tropomyosin상동적면역원성.
