新疆医科大学学报
新疆醫科大學學報
신강의과대학학보
JOURNAL OF XINJIANG MEDICAL UNIVERSITY
2011年
3期
246-250
,共5页
古力帕丽·麦曼提依明%马海梅%陈洁%陈璐%吾拉木·马木提
古力帕麗·麥曼提依明%馬海梅%陳潔%陳璐%吾拉木·馬木提
고력파려·맥만제의명%마해매%진길%진로%오랍목·마목제
细粒棘球绦虫%AgB8/1重组抗原%原核表达质粒
細粒棘毬縚蟲%AgB8/1重組抗原%原覈錶達質粒
세립극구조충%AgB8/1중조항원%원핵표체질립
目的 构建pET32a-AgB8/1原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核细胞表达.方法 从细粒棘球绦虫原头蚴中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板用基因特异性引物扩增EgAgB8/1基因编码其分泌型多肽的片段,经测序后,以此基因片段为依据,人工合成合成EgAgB8/1抗原编码核酸序列,将其克隆至pUCm-T载体,测序鉴定其正确性.通过对pUCm-T/AgB8/1重组质粒进行双酶切,将获得的AgB8/1抗原编码核酸序列用定向克隆技术克隆至原核表达质粒pET32a上,测序鉴定插入片段正确性后,转化至E.coli BL21 (DE3)Lys S,IPTG初步诱导表达pET32a-AgB8/1重组蛋白.用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平.结果 测序表明,AgB8/1抗原编码核酸序列正方向插入至pET32a质粒.SDS-PAGE电泳分析显示,IPTG诱导后重组蛋白得到成功表达,在相对分子量约28 kDa处有表达条带.结论 本研究成功构建了pET32a-AgB8/1原核表达质粒,并初步诱导表达出AgB8/1重组蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础.
目的 構建pET32a-AgB8/1原覈錶達載體,併對其重組蛋白進行原覈細胞錶達.方法 從細粒棘毬縚蟲原頭蚴中提取總RNA,反轉錄生成cDNA,以此cDNA為模闆用基因特異性引物擴增EgAgB8/1基因編碼其分泌型多肽的片段,經測序後,以此基因片段為依據,人工閤成閤成EgAgB8/1抗原編碼覈痠序列,將其剋隆至pUCm-T載體,測序鑒定其正確性.通過對pUCm-T/AgB8/1重組質粒進行雙酶切,將穫得的AgB8/1抗原編碼覈痠序列用定嚮剋隆技術剋隆至原覈錶達質粒pET32a上,測序鑒定插入片段正確性後,轉化至E.coli BL21 (DE3)Lys S,IPTG初步誘導錶達pET32a-AgB8/1重組蛋白.用SDS-PAGE電泳分析鑒定重組蛋白的錶達水平.結果 測序錶明,AgB8/1抗原編碼覈痠序列正方嚮插入至pET32a質粒.SDS-PAGE電泳分析顯示,IPTG誘導後重組蛋白得到成功錶達,在相對分子量約28 kDa處有錶達條帶.結論 本研究成功構建瞭pET32a-AgB8/1原覈錶達質粒,併初步誘導錶達齣AgB8/1重組蛋白,為進一步研究其免疫學特性奠定瞭基礎.
목적 구건pET32a-AgB8/1원핵표체재체,병대기중조단백진행원핵세포표체.방법 종세립극구조충원두유중제취총RNA,반전록생성cDNA,이차cDNA위모판용기인특이성인물확증EgAgB8/1기인편마기분비형다태적편단,경측서후,이차기인편단위의거,인공합성합성EgAgB8/1항원편마핵산서렬,장기극륭지pUCm-T재체,측서감정기정학성.통과대pUCm-T/AgB8/1중조질립진행쌍매절,장획득적AgB8/1항원편마핵산서렬용정향극륭기술극륭지원핵표체질립pET32a상,측서감정삽입편단정학성후,전화지E.coli BL21 (DE3)Lys S,IPTG초보유도표체pET32a-AgB8/1중조단백.용SDS-PAGE전영분석감정중조단백적표체수평.결과 측서표명,AgB8/1항원편마핵산서렬정방향삽입지pET32a질립.SDS-PAGE전영분석현시,IPTG유도후중조단백득도성공표체,재상대분자량약28 kDa처유표체조대.결론 본연구성공구건료pET32a-AgB8/1원핵표체질립,병초보유도표체출AgB8/1중조단백,위진일보연구기면역학특성전정료기출.
