生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
6期
843-850
,共8页
王颖%王俊琦%胡红焱%杨雪鹏%杨寿钧%余小应%金城
王穎%王俊琦%鬍紅焱%楊雪鵬%楊壽鈞%餘小應%金城
왕영%왕준기%호홍염%양설붕%양수균%여소응%금성
烟曲霉(Aspergillus fumigatus),几丁质酶(chitinase),cDNA,表达,稳定性
煙麯黴(Aspergillus fumigatus),幾丁質酶(chitinase),cDNA,錶達,穩定性
연곡매(Aspergillus fumigatus),궤정질매(chitinase),cDNA,표체,은정성
Chi44是烟曲霉(Aspergillus fumigatus)YJ-407产生的一种胞外几丁质酶.通过用真菌几丁质酶保守氨基酸序列与Chi44的N-端序列检索烟曲霉部分基因组序列数据库,获得一个编号为contig555的烟曲霉基因组序列,可能包含烟曲霉几丁质酶的基因.根据检索结果用RT-PCR方法从烟曲霉YJ-407中克隆到1.4kb的cDNA片段,该cDNA的ORF编码一个395个氨基酸的蛋白,分子量为43.6kD.对其推导氨基酸序列分析表明该蛋白与其它真菌来源的几丁质酶同源,而且活性中心与人巨噬细胞几丁质酶高度同源.该cDNA已在E.coli与Pichia pastorisGS115中获得表达,分别获得43kD和44kD的重组蛋白,两种重组蛋白均有几丁质酶活性.与野生酶相比,大肠杆菌表达的43kD重组酶及Pichia酵母表达的44kD重组酶稳定性下降,说明Chi44的糖基化修饰可稳定酶蛋白.
Chi44是煙麯黴(Aspergillus fumigatus)YJ-407產生的一種胞外幾丁質酶.通過用真菌幾丁質酶保守氨基痠序列與Chi44的N-耑序列檢索煙麯黴部分基因組序列數據庫,穫得一箇編號為contig555的煙麯黴基因組序列,可能包含煙麯黴幾丁質酶的基因.根據檢索結果用RT-PCR方法從煙麯黴YJ-407中剋隆到1.4kb的cDNA片段,該cDNA的ORF編碼一箇395箇氨基痠的蛋白,分子量為43.6kD.對其推導氨基痠序列分析錶明該蛋白與其它真菌來源的幾丁質酶同源,而且活性中心與人巨噬細胞幾丁質酶高度同源.該cDNA已在E.coli與Pichia pastorisGS115中穫得錶達,分彆穫得43kD和44kD的重組蛋白,兩種重組蛋白均有幾丁質酶活性.與野生酶相比,大腸桿菌錶達的43kD重組酶及Pichia酵母錶達的44kD重組酶穩定性下降,說明Chi44的糖基化脩飾可穩定酶蛋白.
Chi44시연곡매(Aspergillus fumigatus)YJ-407산생적일충포외궤정질매.통과용진균궤정질매보수안기산서렬여Chi44적N-단서렬검색연곡매부분기인조서렬수거고,획득일개편호위contig555적연곡매기인조서렬,가능포함연곡매궤정질매적기인.근거검색결과용RT-PCR방법종연곡매YJ-407중극륭도1.4kb적cDNA편단,해cDNA적ORF편마일개395개안기산적단백,분자량위43.6kD.대기추도안기산서렬분석표명해단백여기타진균래원적궤정질매동원,이차활성중심여인거서세포궤정질매고도동원.해cDNA이재E.coli여Pichia pastorisGS115중획득표체,분별획득43kD화44kD적중조단백,량충중조단백균유궤정질매활성.여야생매상비,대장간균표체적43kD중조매급Pichia효모표체적44kD중조매은정성하강,설명Chi44적당기화수식가은정매단백.
