军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2007年
1期
39-41
,共3页
黄琳仪%朱欣凯%韩春光%吴芳明%王琼%刘永学
黃琳儀%硃訢凱%韓春光%吳芳明%王瓊%劉永學
황림의%주흔개%한춘광%오방명%왕경%류영학
hGPCRc%α-酮戊二酸钠%钙离子%CHO-hGPCRc%转染%质粒
hGPCRc%α-酮戊二痠鈉%鈣離子%CHO-hGPCRc%轉染%質粒
hGPCRc%α-동무이산납%개리자%CHO-hGPCRc%전염%질립
目的:研究α-酮戊二酸钠对CHO-hGPCRc细胞内钙离子浓度的影响,并分析其变化的原因,从功能上进一步鉴定人源G蛋白偶联受体hGPCRc表达细胞的可靠性.方法:将重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hGPCRc转染入CHO-K1细胞,经G418 (800 μg/ml)作用7～10 d,挑选、扩增阳性克隆,得到CHO-hGPCRc细胞,再以RT-PCR检测所得细胞内hGPCRc mRNA的表达;然后用不同浓度的α-酮戊二酸钠诱导该细胞,通过激光扫描共聚焦显微镜观察Fluo-3标记细胞内钙离子变化,以及细胞外钙离子对其影响.结果:(1)RT-PCR结果表明,所得CHO-hGPCRc细胞能够稳定表达hGPCRc的mRNA;(2)α-酮戊二酸钠可引起细胞内钙离子浓度的变化,表现为钙波动幅度明显增加,并呈浓度依赖性;(3)α-酮戊二酸钠引起的细胞内钙波动,不是细胞外钙离子内流所致,而是细胞内钙库动员的结果.结论:α-酮戊二酸钠为hGPCRc的特异性配基,CHO-hGPCRc细胞能够稳定表达具有功能活性的hGPCRc受体,为进一步开展hGPCRc研究奠定了基础.
目的:研究α-酮戊二痠鈉對CHO-hGPCRc細胞內鈣離子濃度的影響,併分析其變化的原因,從功能上進一步鑒定人源G蛋白偶聯受體hGPCRc錶達細胞的可靠性.方法:將重組錶達質粒pcDNA3.1(+)-hGPCRc轉染入CHO-K1細胞,經G418 (800 μg/ml)作用7～10 d,挑選、擴增暘性剋隆,得到CHO-hGPCRc細胞,再以RT-PCR檢測所得細胞內hGPCRc mRNA的錶達;然後用不同濃度的α-酮戊二痠鈉誘導該細胞,通過激光掃描共聚焦顯微鏡觀察Fluo-3標記細胞內鈣離子變化,以及細胞外鈣離子對其影響.結果:(1)RT-PCR結果錶明,所得CHO-hGPCRc細胞能夠穩定錶達hGPCRc的mRNA;(2)α-酮戊二痠鈉可引起細胞內鈣離子濃度的變化,錶現為鈣波動幅度明顯增加,併呈濃度依賴性;(3)α-酮戊二痠鈉引起的細胞內鈣波動,不是細胞外鈣離子內流所緻,而是細胞內鈣庫動員的結果.結論:α-酮戊二痠鈉為hGPCRc的特異性配基,CHO-hGPCRc細胞能夠穩定錶達具有功能活性的hGPCRc受體,為進一步開展hGPCRc研究奠定瞭基礎.
목적:연구α-동무이산납대CHO-hGPCRc세포내개리자농도적영향,병분석기변화적원인,종공능상진일보감정인원G단백우련수체hGPCRc표체세포적가고성.방법:장중조표체질립pcDNA3.1(+)-hGPCRc전염입CHO-K1세포,경G418 (800 μg/ml)작용7～10 d,도선、확증양성극륭,득도CHO-hGPCRc세포,재이RT-PCR검측소득세포내hGPCRc mRNA적표체;연후용불동농도적α-동무이산납유도해세포,통과격광소묘공취초현미경관찰Fluo-3표기세포내개리자변화,이급세포외개리자대기영향.결과:(1)RT-PCR결과표명,소득CHO-hGPCRc세포능구은정표체hGPCRc적mRNA;(2)α-동무이산납가인기세포내개리자농도적변화,표현위개파동폭도명현증가,병정농도의뢰성;(3)α-동무이산납인기적세포내개파동,불시세포외개리자내류소치,이시세포내개고동원적결과.결론:α-동무이산납위hGPCRc적특이성배기,CHO-hGPCRc세포능구은정표체구유공능활성적hGPCRc수체,위진일보개전hGPCRc연구전정료기출.
