CAJ | 학술논문

目的:构建带HIV-1 TAT转录因子的穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的pET28a-PTD-Foxp3原核表达载体,表达纯化PTD-Foxp3融合蛋白,并研究其生物学作用.方法:利用基因重组技术构建pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,经Ni2+分离柱纯化pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白.流式细胞术检测融合蛋白穿越细胞膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力,并通过混合淋巴细胞反应初步分析融合蛋白抑制T细胞活化增殖的生物学作用.结果:成功地构建了pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白表达载体,表达并纯化了pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白.通过流式细胞术分析证实pET28a-PTD-Foxp3融合蛋白能有效地进入细胞内;同时经混合淋巴细胞反应证明该融合蛋白能明显抑制T细胞的活化增殖能力.结论:成功表达具有生物学活性的PTD-Foxp3融合蛋白,为进一步研究PTD-Foxp3融合蛋白免疫抑制功能和构建表达人PTD-Foxp3融合蛋白,最终应用于临床疾病的治疗奠定了基础.
목적:구건대HIV-1 TAT전록인자적천막서렬(Protein transduction domain,PTD)적pET28a-PTD-Foxp3원핵표체재체,표체순화PTD-Foxp3융합단백,병연구기생물학작용.방법:이용기인중조기술구건pET28a-PTD-Foxp3융합단백표체재체,병재대장애희균Rosetta(DE3)중표체융합단백,경Ni2+분리주순화pET28a-PTD-Foxp3융합단백.류식세포술검측융합단백천월세포막진입소서T림파세포류주EL-4세포중적능력,병통과혼합림파세포반응초보분석융합단백억제T세포활화증식적생물학작용.결과:성공지구건료pET28a-PTD-Foxp3융합단백표체재체,표체병순화료pET28a-PTD-Foxp3융합단백.통과류식세포술분석증실pET28a-PTD-Foxp3융합단백능유효지진입세포내;동시경혼합림파세포반응증명해융합단백능명현억제T세포적활화증식능력.결론:성공표체구유생물학활성적PTD-Foxp3융합단백,위진일보연구PTD-Foxp3융합단백면역억제공능화구건표체인PTD-Foxp3융합단백,최종응용우림상질병적치료전정료기출.