西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2007年
4期
86-90
,共5页
李红民%郝瑞文%郝建国%贾敬芬
李紅民%郝瑞文%郝建國%賈敬芬
리홍민%학서문%학건국%가경분
肿瘤血管生成抑制因子%Arresten基因%植物表达载体%转化%烟草
腫瘤血管生成抑製因子%Arresten基因%植物錶達載體%轉化%煙草
종류혈관생성억제인자%Arresten기인%식물표체재체%전화%연초
肿瘤血管生成抑制因子Arresten是人Ⅳ型胶原蛋白α1链羧基末端NC1结构域多肽片段,可抑制新血管生成.研究拟实现该基因对烟草细胞的转化,为进一步利用植物细胞表达该蛋白奠定基础.①采用RT-PCR法从人胎盘组织克隆Arresten基因cDNA,克隆产物经酶切后定向插入到植物双元表达载体pCAMBIA1301的Nco Ⅰ和BstEⅡ位点之间,构建成含有目的基因的植物表达载体pCA,经PCR、限制性内切酶检测及序列测定正确后,转化根癌农杆菌LBA4404,获得携带目的基因的重组农杆菌.②采用叶盘转化法,以重组农杆菌转化烟草.在hygromy-cin选择压力下获得烟草转化不定芽和完整植株,经PCR检测初步证实,Arresten基因已导人烟草基因组中.该研究首次将Arresten基因导人高等植物基因组中,为避免利用原核细胞或动物细胞表达Arresten的潜在问题,以及进一步利用植物进行该基因的大规模廉价表达奠定了基础.
腫瘤血管生成抑製因子Arresten是人Ⅳ型膠原蛋白α1鏈羧基末耑NC1結構域多肽片段,可抑製新血管生成.研究擬實現該基因對煙草細胞的轉化,為進一步利用植物細胞錶達該蛋白奠定基礎.①採用RT-PCR法從人胎盤組織剋隆Arresten基因cDNA,剋隆產物經酶切後定嚮插入到植物雙元錶達載體pCAMBIA1301的Nco Ⅰ和BstEⅡ位點之間,構建成含有目的基因的植物錶達載體pCA,經PCR、限製性內切酶檢測及序列測定正確後,轉化根癌農桿菌LBA4404,穫得攜帶目的基因的重組農桿菌.②採用葉盤轉化法,以重組農桿菌轉化煙草.在hygromy-cin選擇壓力下穫得煙草轉化不定芽和完整植株,經PCR檢測初步證實,Arresten基因已導人煙草基因組中.該研究首次將Arresten基因導人高等植物基因組中,為避免利用原覈細胞或動物細胞錶達Arresten的潛在問題,以及進一步利用植物進行該基因的大規模廉價錶達奠定瞭基礎.
종류혈관생성억제인자Arresten시인Ⅳ형효원단백α1련최기말단NC1결구역다태편단,가억제신혈관생성.연구의실현해기인대연초세포적전화,위진일보이용식물세포표체해단백전정기출.①채용RT-PCR법종인태반조직극륭Arresten기인cDNA,극륭산물경매절후정향삽입도식물쌍원표체재체pCAMBIA1301적Nco Ⅰ화BstEⅡ위점지간,구건성함유목적기인적식물표체재체pCA,경PCR、한제성내절매검측급서렬측정정학후,전화근암농간균LBA4404,획득휴대목적기인적중조농간균.②채용협반전화법,이중조농간균전화연초.재hygromy-cin선택압력하획득연초전화불정아화완정식주,경PCR검측초보증실,Arresten기인이도인연초기인조중.해연구수차장Arresten기인도인고등식물기인조중,위피면이용원핵세포혹동물세포표체Arresten적잠재문제,이급진일보이용식물진행해기인적대규모렴개표체전정료기출.
