生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2009年
2期
104-108
,共5页
胡正龙%肖旭倩%沈文涛%言普%周鹏
鬍正龍%肖旭倩%瀋文濤%言普%週鵬
호정룡%초욱천%침문도%언보%주붕
PRSV-VPg%基因改造%长引物延伸%套叠PCR
PRSV-VPg%基因改造%長引物延伸%套疊PCR
PRSV-VPg%기인개조%장인물연신%투첩PCR
以P型PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPg gene)基因为模板利用高保真酶通过两对引物(突变4个位点),PCR扩增获得一条276 bp和一条141 bp的两个小片段.以此为基础,利用长引物延伸和套叠PCR的方法,定点突变剩余5个位点,最后拼接获得W型PRSV-VPg基因.结果表明通过上述方案可以成功改造P型PRSV-VPg基因,获得与W型朋PRSV-VPg同源的目的基因,成功率为100%.该技术可以绕开传统的通过寻找毒源进行RT-PCR方法和人工合成方法获得病毒基因,其技术操作简单,且节约时间和成本,并在人工合成基因、多位点基因定点突变等方面具有很好的借鉴作用和应用价值.
以P型PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPg gene)基因為模闆利用高保真酶通過兩對引物(突變4箇位點),PCR擴增穫得一條276 bp和一條141 bp的兩箇小片段.以此為基礎,利用長引物延伸和套疊PCR的方法,定點突變剩餘5箇位點,最後拼接穫得W型PRSV-VPg基因.結果錶明通過上述方案可以成功改造P型PRSV-VPg基因,穫得與W型朋PRSV-VPg同源的目的基因,成功率為100%.該技術可以繞開傳統的通過尋找毒源進行RT-PCR方法和人工閤成方法穫得病毒基因,其技術操作簡單,且節約時間和成本,併在人工閤成基因、多位點基因定點突變等方麵具有很好的藉鑒作用和應用價值.
이P형PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPg gene)기인위모판이용고보진매통과량대인물(돌변4개위점),PCR확증획득일조276 bp화일조141 bp적량개소편단.이차위기출,이용장인물연신화투첩PCR적방법,정점돌변잉여5개위점,최후병접획득W형PRSV-VPg기인.결과표명통과상술방안가이성공개조P형PRSV-VPg기인,획득여W형붕PRSV-VPg동원적목적기인,성공솔위100%.해기술가이요개전통적통과심조독원진행RT-PCR방법화인공합성방법획득병독기인,기기술조작간단,차절약시간화성본,병재인공합성기인、다위점기인정점돌변등방면구유흔호적차감작용화응용개치.
