中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
1期
15-19
,共5页
结核分枝杆菌%Ag85A基因%DNA基因疫苗%人白细胞介素12质粒%联合免疫
結覈分枝桿菌%Ag85A基因%DNA基因疫苗%人白細胞介素12質粒%聯閤免疫
결핵분지간균%Ag85A기인%DNA기인역묘%인백세포개소12질립%연합면역
目的:构建编码结核分枝杆菌Ag85A分泌蛋白重组真核表达质粒,研究其与hIL-12联合免疫小鼠后的细胞免疫应答.方法:(1)构建质粒:采用PCR法从H37Rv菌株中扩增Ag85A编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体PMD20-T中,经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体PCDNA3.1的相应酶切位点.(2)动物实验:50只C57BL/6N小鼠随机分为:①Ag85A基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组);②重组Ag85A基因疫苗组;③卡介苗BCG组(阳性对照);④空载体组(阴性对照);⑤PBS组(空白对照).基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106 CFU BCG免疫1次,约0.3 ml/只.第三次免疫小鼠后28天,处死各组小鼠,分离脾细胞,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFN-?、IL-2、IL-4水平;乳酸脱氢酶释放法检测脾细胞杀伤活性;分离的脾细胞经TB-PPD刺激后,XTT比色法检测脾淋巴细胞增殖活性.结果:(1)成功构建结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗.(2)联合免疫组能诱导较强烈的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-r和IL-2水平显著高于Ag85A基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少;特异性CTL杀伤活性明显增强;淋巴细胞增殖活性也明显高于其他组别.结论:hlL-12表达质粒能够增强结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗所诱导的小鼠免疫应答.
目的:構建編碼結覈分枝桿菌Ag85A分泌蛋白重組真覈錶達質粒,研究其與hIL-12聯閤免疫小鼠後的細胞免疫應答.方法:(1)構建質粒:採用PCR法從H37Rv菌株中擴增Ag85A編碼基因,用限製性內切酶消化後,插入剋隆載體PMD20-T中,經酶切鑒定與序列測定證實後,以亞剋隆法構建于真覈錶達載體PCDNA3.1的相應酶切位點.(2)動物實驗:50隻C57BL/6N小鼠隨機分為:①Ag85A基因疫苗+hIL-12質粒組(聯閤免疫組);②重組Ag85A基因疫苗組;③卡介苗BCG組(暘性對照);④空載體組(陰性對照);⑤PBS組(空白對照).基因疫苗、空載體和PBS經肌內註射法免疫各組小鼠,每隔3週免疫1次,共免疫3次,BCG組經尾部皮下註射1×106 CFU BCG免疫1次,約0.3 ml/隻.第三次免疫小鼠後28天,處死各組小鼠,分離脾細胞,ELISA法檢測脾細胞培養上清液中IFN-?、IL-2、IL-4水平;乳痠脫氫酶釋放法檢測脾細胞殺傷活性;分離的脾細胞經TB-PPD刺激後,XTT比色法檢測脾淋巴細胞增殖活性.結果:(1)成功構建結覈分枝桿菌Ag85A基因DNA疫苗.(2)聯閤免疫組能誘導較彊烈的抗原特異性Th1型細胞免疫應答,免疫小鼠脾細胞培養上清液IFN-r和IL-2水平顯著高于Ag85A基因疫苗組,與BCG組相噹,IL-4分泌減少;特異性CTL殺傷活性明顯增彊;淋巴細胞增殖活性也明顯高于其他組彆.結論:hlL-12錶達質粒能夠增彊結覈分枝桿菌Ag85A基因DNA疫苗所誘導的小鼠免疫應答.
목적:구건편마결핵분지간균Ag85A분비단백중조진핵표체질립,연구기여hIL-12연합면역소서후적세포면역응답.방법:(1)구건질립:채용PCR법종H37Rv균주중확증Ag85A편마기인,용한제성내절매소화후,삽입극륭재체PMD20-T중,경매절감정여서렬측정증실후,이아극륭법구건우진핵표체재체PCDNA3.1적상응매절위점.(2)동물실험:50지C57BL/6N소서수궤분위:①Ag85A기인역묘+hIL-12질립조(연합면역조);②중조Ag85A기인역묘조;③잡개묘BCG조(양성대조);④공재체조(음성대조);⑤PBS조(공백대조).기인역묘、공재체화PBS경기내주사법면역각조소서,매격3주면역1차,공면역3차,BCG조경미부피하주사1×106 CFU BCG면역1차,약0.3 ml/지.제삼차면역소서후28천,처사각조소서,분리비세포,ELISA법검측비세포배양상청액중IFN-?、IL-2、IL-4수평;유산탈경매석방법검측비세포살상활성;분리적비세포경TB-PPD자격후,XTT비색법검측비림파세포증식활성.결과:(1)성공구건결핵분지간균Ag85A기인DNA역묘.(2)연합면역조능유도교강렬적항원특이성Th1형세포면역응답,면역소서비세포배양상청액IFN-r화IL-2수평현저고우Ag85A기인역묘조,여BCG조상당,IL-4분비감소;특이성CTL살상활성명현증강;림파세포증식활성야명현고우기타조별.결론:hlL-12표체질립능구증강결핵분지간균Ag85A기인DNA역묘소유도적소서면역응답.
