南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
11期
1846-1850
,共5页
宋远斌%余楠%何思杰%陈欣欣%王斌%车小燕%曾其毅
宋遠斌%餘楠%何思傑%陳訢訢%王斌%車小燕%曾其毅
송원빈%여남%하사걸%진흔흔%왕빈%차소연%증기의
肠道病毒71型%基因克隆%原核表达%免疫原性
腸道病毒71型%基因剋隆%原覈錶達%免疫原性
장도병독71형%기인극륭%원핵표체%면역원성
目的 克隆并表达肠道病毒71型VP1～VP4蛋白基因,初步鉴定其免疫原性.方法 抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1～VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物用8 mol/L尿素洗涤及Ni柱亲和层析纯化后,用肠道病毒71型免疫兔血清和柯萨奇病毒A16型免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA鉴定.结果 构建的重组质粒pQE30a/VP1～VP4经IPTG诱导,重组蛋白VP1～VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1～VP4可以被免疫兔血清特异识别.结论 肠道病毒71型VP1～VP4蛋白表达载体在大肠杆菌M15中高效表达.纯化产物具有较强的免疫原性,为今后EV71亚单位疫苗的研究和检测试剂盒提供了参考.
目的 剋隆併錶達腸道病毒71型VP1～VP4蛋白基因,初步鑒定其免疫原性.方法 抽提病毒RNA,經RT-PCR方法分彆擴增齣VP1～VP4蛋白基因片段,經剋隆後,在QIA錶達繫統中錶達,錶達產物用8 mol/L尿素洗滌及Ni柱親和層析純化後,用腸道病毒71型免疫兔血清和柯薩奇病毒A16型免疫兔血清對重組蛋白進行Western blotting及ELISA鑒定.結果 構建的重組質粒pQE30a/VP1～VP4經IPTG誘導,重組蛋白VP1～VP4高效錶達併純化成功,經Western blotting及ELISA證實重組蛋白VP1～VP4可以被免疫兔血清特異識彆.結論 腸道病毒71型VP1～VP4蛋白錶達載體在大腸桿菌M15中高效錶達.純化產物具有較彊的免疫原性,為今後EV71亞單位疫苗的研究和檢測試劑盒提供瞭參攷.
목적 극륭병표체장도병독71형VP1～VP4단백기인,초보감정기면역원성.방법 추제병독RNA,경RT-PCR방법분별확증출VP1～VP4단백기인편단,경극륭후,재QIA표체계통중표체,표체산물용8 mol/L뇨소세조급Ni주친화층석순화후,용장도병독71형면역토혈청화가살기병독A16형면역토혈청대중조단백진행Western blotting급ELISA감정.결과 구건적중조질립pQE30a/VP1～VP4경IPTG유도,중조단백VP1～VP4고효표체병순화성공,경Western blotting급ELISA증실중조단백VP1～VP4가이피면역토혈청특이식별.결론 장도병독71형VP1～VP4단백표체재체재대장간균M15중고효표체.순화산물구유교강적면역원성,위금후EV71아단위역묘적연구화검측시제합제공료삼고.
